犬诺如病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

作     者：马会强 岳华 汤承 MA Hui-qiang;YUE Hua;TANG Cheng

作者机构：西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 

基　　金：西南民族大学新发动物疫病创新团队(2020NTD02) 国家民委领军人才支持计划 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第43卷第6期

页      码：626-632页

摘      要：犬诺如病毒(CNV)是一种致犬腹泻的病原,目前中国大陆尚无关于CNV的报道,为建立特异灵敏的检测CNV的RT-PCR方法,本研究选择CNV RdRp基因作为靶基因,设计引物,并通过对反应体系及条件的优化,建立了检测CNV的RT-PCR方法。利用该方法同时检测CNV、犬瘟热病毒、犬冠状病毒、犬轮状病毒、犬星状病毒、犬库布病毒、犬细小病毒2型、犬腺病毒2型、犬微小病毒、犬圆环病毒和犬源大肠杆菌、犬源沙门氏菌等致犬腹泻的病原,结果显示该方法仅对CNV检测为阳性,而对其他病原检测均为阴性,特异性较强;将pMD-RdRp标准品10倍倍比稀释后利用该方法检测,结果显示对pMD-RdRp标准品的检测下限为4.64×10^(3)拷贝/μL,敏感性较高;批内、批间重复性试验结果一致,重复性较好。利用该方法和国外文献报道的3种RT-PCR方法同时对107份犬腹泻样品进行检测,结果显示该方法对CNV的检出率为4.67%(5/107),其他3种方法的检出率分别为0(0/107)、0.93%(1/107)、0.93%(1/107)。从5份CNV阳性样品中扩增了4条完整的RdRp基因,测序并且比对结果显示,4个完整RdRp基因序列聚为2个大支,表明中国大陆流行的CNV至少有2种不同的RdRp基因型。本实验建立了检测CNV的RT-PCR方法,并首次证明CNV在中国大陆存在,为国内犬腹泻的防控提供了重要参考。

主 题 词：犬诺如病毒 RT-PCR RdRp基因 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.202012029

馆 藏 号：203104648...