Kcnh6点突变单基因糖尿病家系的小鼠模型构建及表型分析

作     者：熊枫然 卢晶 张英超 谢荣荣 赵儒轩 李奇 杨金奎 Xiong Fengran;Lu Jing;Zhang Yingchao;Xie Rongrong;Zhao Ruxuan;Li Qi;Yang Jinkui

作者机构：首都医科大学附属北京同仁医院内分泌科糖尿病防治研究北京市重点实验室北京市糖尿病研究所北京100730 

基　　金：国家自然科学基金(81800688,82070890,81930019) 国家重点研发计划(2017YFC0909600) 北京市属医院科研培育计划(PX2019006) 

出 版 物：《首都医科大学学报》 (Journal of Capital Medical University)

年 卷 期：2021年第42卷第4期

页      码：575-581页

摘      要：目的通过CRISPR/Cas9技术构建Kcnh6基因P235L位点基因敲入定点突变小鼠模型,并验证该突变能否成功复制人类糖尿病家系表型,为接下来研究Kcnh6基因在糖尿病发病中的作用提供更精确的实验工具。方法设计针对已知糖尿病家系点突变位点的sgRNA(small guide RNA,sgRNA),同时制作一个携带靶位点同源臂、突变位点序列的供体DNA敲入载体。将sgRNA、cas9 mRNA和敲入载体通过显微注射移入小鼠的受精卵,选取其中存活的受精卵将其移植入假孕小鼠子宫,繁育得到子代小鼠。采用聚合酶链反应和基因测序等方法检测子代小鼠Kcnh6基因碱基突变情况。监测基因敲入小鼠的体质量和并对小鼠做糖耐量和胰岛素分泌实验。结果成功构建Kcnh6-P235L位点基因敲入纯合子小鼠。在高脂饲料喂养条件下,与同窝野生型(wild type,WT)小鼠相比,Kcnh6基因插入(knock in,KI)点突变小鼠的体质量增加,糖耐量及胰岛素分泌功能受损。结论成功构建了Kcnh6基因点突变敲入小鼠模型,且此模型具有糖尿病相关表型。

主 题 词：CRISPR/Cas9 定点突变 Kcnh6基因 糖耐量异常 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-7795.2021.04.011

馆 藏 号：203104649...