兔源强毒力金黄色葡萄球菌环介导等温扩增快速检测方法的建立

作     者：王锦祥 孙世坤 陈岩峰 陈冬金 桑雷 谢喜平 WANG Jin-xiang;SUN Shi-kun;CHEN Yan-feng;CHEN Dong-jin;SANG Lei;XIE Xi-ping

作者机构：福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 

基　　金：福建省自然科学基金(2020J01346) 福建省科技计划公益类专项(2019R1026-9) 国家兔产业技术体系专项(CARS-43-G-5) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第43卷第6期

页      码：621-625页

摘      要：为建立检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的快速检测方法,本实验根据GenBank中登录的金黄色葡萄球菌pvl基因保守序列设计了2对引物,经反应条件优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。结果显示,该LAMP快速检测方法最优反应条件为:外引物和内引物的浓度比为1.7,反应温度为65℃,反应时间为60 min。利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取兔源强毒力金黄色葡萄球菌、低毒力金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌DNA,利用该方法检测,结果显示仅兔源强毒力金黄色葡萄球菌检测为阳性结果,其他均为阴性,无交叉反应,该方法特异性较强;将兔源强毒力金黄色葡萄球菌基因组DNA的浓度设置为1×10^(8)拷贝/μL~1×10^(0)拷贝/μL,利用本研究建立的方法检测,结果显示对兔源强毒力金黄色葡萄球菌基因组DNA的最低检出限为1×10^(2)拷贝/μL,其敏感性为双重PCR方法的100倍,敏感性高;利用该方法进行批内和批间重复性试验,结果均一致,重复性较好。利用该方法检测88份临床样品,结果显示与已报道的双重PCR方法检测结果的符合率为100%。本研究在国内首次建立了兔源强毒力金黄色葡萄球菌LAMP方法,为该病原的快速检测提供了有效的技术手段。

主 题 词：兔 强毒力金黄色葡萄球菌 pvl基因 LAMP检测方法 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.202011036

馆 藏 号：203104669...