猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步临床应用

作     者：丁庆文 闫晓光 张红垒 李倩倩 张云飞 舒祥力 单法 李林姣 胡慧 DING Qing-wen;YAN Xiao-guang;ZHANG Hong-lei;LI Qian-qian;ZHANG Yun-fei;SHU Xiang-li;SHAN Fa;LI Lin-jiao;HU Hui

作者机构：河南农业大学动物医学院河南郑州450002 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002 

基　　金：国家重点研发计划(2016YFD0500102) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第43卷第6期

页      码：615-620,632页

摘      要：猪δ冠状病毒(PDCoV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)可引起新生仔猪腹泻、呕吐,猪萨佩罗病毒(PSV)可引起猪脑脊髓灰质炎、腹泻等多系统综合征,临床上这3种病毒混合感染很普遍,疾病症状相似,依靠临床症状和剖检变化很难对这3种病毒做鉴别检测,需借助实验室诊断方法。为了建立快速鉴别检测这种病毒的方法,本研究参照GenBank中登录的PEDV M基因、PDCoV N基因和PSV 2C基因的保守序列,利用Prime6.0软件设计3对引物,经各反应条件的优化建立了能同时检测PDCoV、PEDV和PSV的多重RT-PCR方法,并进行特异性、敏感度和重复性试验。结果显示,该方法除了对PDCoV、PEDV和PSV有特异性扩增外,对猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪博卡病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等猪常见病毒的扩增结果均为阴性,特异性较强;建立的多重RT-PCR方法对3种重组质粒标准品的最低检测限分别为1.40×10^(2)拷贝/μL(PDCoV)、1.53×10^(2)拷贝/μL(PEDV)、1.57×10^(3)拷贝/μL(PSV);而以3种质粒标准品为模板的各单一PCR对PDCoV、PEDV和PSV的检测限分别为1.40×10^(2)拷贝/μL、1.53×10^(2)拷贝/μL、1.57×10^(2)拷贝/μL,该方法虽然对PSV质粒标准品检测的敏感性较低,但总体而言敏感性较高。以PDCoV、PSV病毒核酸及PEDV阳性病料的cDNA为模板,不同时间重复检测3次,检测结果均一致,表明该方法重复性较好。利用该方法和各单一PCR分别对河南部分地市的92份临床腹泻猪的粪便样品和肠道样品进行检测。多重RT-PCR的检测结果显示,PDCoV、PEDV和PSV阳性检出率分别为39.13%(36/92)、57.61%(53/92)和22.83%(21/92);PDCoV、PEDV和PSV 3种病毒混合感染样品3份,阳性检出率为3.26%;与单一RT-PCR方法的检测结果均一致,且两种方法的符合率均为100%。本研究建立的多重RT-PCR检测方法为PDCoV、PEDV和PSV的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。

主 题 词：猪δ冠状病毒 猪流行性腹泻病毒 猪萨佩罗病毒 多重RT-PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.202008009

馆 藏 号：203104679...