转基因玉米双抗12-5荧光RPA现场可视化检测方法的建立

作     者：陈欲 陈笑芸 彭城 徐俊锋 沈洁 李玥莹 汪小福 Yu Chen;Xiaoyun Chen;Cheng Peng;Junfeng Xu;Jie Shen;Yueying Li;Xiaofu Wang

作者机构：浙江省农业科学院农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室杭州310021 沈阳师范大学生命科学学院沈阳110034 宁夏医科大学临床医学院银川750004 

基　　金：国家自然科学基金项目(编号:31772098)资助 

出 版 物：《遗传》 (Hereditas（Beijing))

年 卷 期：2021年第43卷第8期

页      码：802-812页

摘      要：转基因玉米双抗12-5具有良好的抗虫性和除草剂耐受性,是我国第一批获得安全证书的转基因玉米之一,具有广阔的应用前景。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)建立转基因玉米双抗12-5的现场快速检测方法。针对转基因玉米双抗12-5的转化体特异性序列片段,设计引物和探针,通过引物筛选实验得到最佳引物与探针组合。荧光RPA扩增结果可以在蓝光下直接进行可视化分析。结果表明,建立的转基因玉米双抗12-5可视化检测体系特异性强,检测灵敏度达到10拷贝。进一步研究发现RPA的扩增体系对温度有很强的适应性,样品在34℃~46℃之间都能得到扩增,据此,本研究利用市面上常见的自发热暖贴代替常规的加热仪器来激发RPA。结果表明,自发热暖贴满足RPA扩增体系对温度的需要。最终,本研究将自发热暖贴加热法与RPA可视化检测体系结合,对转基因玉米双抗12-5进行现场检测,并与qPCR方法检测结果作比较,检测结果表明,本研究建立的现场可视化检测方法与qPCR方法检测结果一致,并且可视化检测方法时间短,检测结果清晰易分辨。本研究建立的转基因玉米双抗12-5现场快速可视化检测方法,其特异性强、灵敏度高、方便、快捷,不仅满足了转基因玉米双抗12-5的现场快速检测的需要,也为其他现场快速检测方法的开发提供了新思路。

主 题 词：转基因玉米 RPA 可视化检测 现场检测 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16288/j.yczz.21-110

馆 藏 号：203104717...