中国蓝舌病病毒流行株血清型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

作     者：宋子昂 李占鸿 杨振兴 李卓然 刘威 李华春 廖德芳 杨恒 SONG Ziang;LI Zhanhong;YANG Zhenxing;LI Zhuoran;LIU Wei;LI Huachun;LIAO Defang;YANG Heng

作者机构：云南农业大学动物医学院云南昆明650201 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 内蒙古自治区农牧业科学院内蒙古呼和浩特010031 

基　　金：国家重点研发计划(2017YFC1200505) 国家自然科学基金(31760744) 国家公益性行业(农业)专项(201303035) 云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目(2017HB055) 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2021年第48卷第8期

页      码：2920-2932页

摘      要：【背景】蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)是一种严重危害反刍动物的虫媒病毒,我国存在12种血清型BTV(BTV-1、-2、-3、-4、-5、-7、-9、-12、-15、-16、-21和-24)的流行。【目的】建立12种血清型BTV的RT-qPCR定型方法,为BTV的诊断与流行病学研究提供技术保障。【方法】根据我国流行BTV基因节段2(Seg-2)序列设计引物和TaqMan探针,对引物的特异性与敏感性进行评估;以12种血清型BTV毒株和核酸阳性血液样本验证建立的血清型RT-qPCR检测方法;将其应用于库蠓与动物血液样本中BTV的定型。【结果】建立的BTV血清型RT-qPCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,反应的扩增效率(E)值>90.3%,相关系数(R2)值在0.991-0.999之间,对12种血清型BTV核酸的检测下限在25-48拷贝之间。对165株BTV的RT-qPCR定型结果与病毒的Seg-2测序鉴定结果一致;对194份采集于哨兵动物的BTV核酸阳性血液样本的RT-qPCR定型结果与感染动物上分离BTV的血清型一致。采用建立的方法,从2019年云南省师宗县与景洪市采集的库蠓与牛血液样本中鉴定出6种血清型的BTV(BTV-1、-2、-4、-5、-16和-24)。【结论】研究建立的12种BTV血清型RT-qPCR定型方法具有特异、敏感和省时的优点,可用于媒介与动物感染BTV的血清型定型,具有良好的应用与推广价值。

主 题 词：蓝舌病病毒 血清型 实时荧光定量RT-PCR 应用 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.13344/j.microbiol.china.200977

馆 藏 号：203104718...