可视化LAMP技术快速检测新冠病毒的方法

作     者：黄旭春 关丽梅 况文东 占智高 王金昌 陈俊辉 马广强 靳亮 HUANG Xuchun;GUAN Limei;KUANG Wendong;ZHAN Zhigao;WANG Jinchang;CHEN Junhui;MA Guangqiang;JIN Liang

作者机构：江西省科学院微生物研究所南昌330096 江西中医药大学中医学院南昌330004 

基　　金：江西省重点项目(2020YBBGW0002) 国家自然科学基金项目(81960808) 江西省自然科学基金项目(20192ACB20008) 

出 版 物：《江西科学》 (Jiangxi Science)

年 卷 期：2021年第39卷第4期

页      码：593-596,621页

摘      要：根据时代需要,利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplifcation,LAMP)对新冠病毒进行快速检测,以研发出新冠病毒检测试剂盒。通过NCBI公布的新冠基因组序列分析,获得新冠病毒特异性N蛋白基因的序列;根据该序列信息,在线设计的几对环介导等温扩增引物以供筛选,并利用新冠病毒全基因的反转录质粒,同时通过大量的实验尝试,得到较为稳定的环介导等温扩增体系,再加入具有逆转录活性的Bst3.0 DNA聚合酶,使体系可扩增RNA模板,最后通过加入适量染料,完成反应结果的可视化。通过不断的实验优化,得到了较为稳定的扩增体系如下:2×Lamp Master Mix 12.5μL,Bst 3.0 DNA聚合酶0.5μL,内引物FIP、BIP(10μM)各2μL、外引物F3、B3(10μM)各0.5μL、模板1μL、dd H_2O 7μL,该体系在65℃下水浴加热1 h即可,同时在体系中加入MnCl_(2)溶液(15 m M)1μL、钙黄绿素(500μM)3μL,使反应结果肉眼可断,加入模板的体系变为绿色,而未加模板的体系为棕黄色。结论:本实验研究的可视化LAMP检测新冠病毒的方法可用于对广大人民群众进行新冠病毒核酸检测。

主 题 词：新冠肺炎 新冠病毒 N蛋白基因 LAMP环介导等温扩增 可视化 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13990/j.issn1001-3679.2021.04.004

馆 藏 号：203104818...