新型鹅星状病毒ORF2基因的原核表达及多克隆抗体的制备

作     者：张硕 谢军 顾玲玲 方馨慧 嵇珊珊 陶静 朱善元 陈丽 王安平 ZHANG Shuo;XIE Jun;GU Lingling;FANG Xinhui;JI Shanshan;TAO Jing;ZHU Shanyuan;CHEN Li;WANG Anping

作者机构：江苏海洋大学食品科学与工程学院江苏连云港222005 江苏海洋大学江苏省海洋生物资源与环境重点实验室江苏连云港222005 江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室江苏泰州225300 江苏海洋大学江苏省海洋资源开发研究院江苏连云港222005 

基　　金：江苏省农业科技自主创新项目(CX(18)1004) 江苏省现代农业产业技术体系集成创新中心(JATS345) 江苏高校“青蓝工程”苏教师函10号 江苏省高等学校自然科学研究重大项目(18KJA230001) 江苏省研究生实践创新项目(SJCX191013) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第53卷第9期

页      码：78-82页

摘      要：以新型鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)ORF2基因为序列设计1对特异性引物,利用PCR方法进行扩增,将其克隆到原核表达载体pET-30a中,转化DH5α感受态细胞,经酶切鉴定及测序后,获得重组质粒pET30a-ORF2。随后转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白。将鉴定正确的重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗鹅星状病毒衣壳蛋白的多克隆抗体。结果:成功获得ORF2基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,大小约84 kDa,且均能与His单抗和鹅阳性血清特异反应。制备的多克隆抗体,Western blot检测能与重组蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光试验(IFA)检测也能与新型鹅星状病毒发生特异性反应。本试验结果表明,原核表达的新型鹅星状病毒结构蛋白ORF2及制备的多抗均具有良好的免疫原性和反应原性,为新型鹅星状病毒检测方法的建立及ORF2基因功能研究奠定了基础。

主 题 词：新型鹅星状病毒 ORF2基因 原核表达 多克隆抗体 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203104842...