鉴别检测非洲猪瘟野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR的建立

作     者：林彦星 史卫军 曹琛福 黄超华 曾少灵 吴江 徐鹏 花群义 LIN Yanxing;SHI Weijun;CAO Chenfu;HUANG Chaohua;ZENG Shaoling;WU Jiang;XU Peng;HUA Qunyi

作者机构：深圳海关动植物检验检疫技术中心深圳518045 

基　　金：国家重点研发计划项目资助(项目号:2018YFC0840401),题目:非洲猪瘟病毒流行病学与检测技术研究 国家重点研发计划项目资助(项目号:2016YFD0500708),题目:猪重要疫病分子检测技术研究 海关总署科研项目(项目号:2019HK019),题目:非洲猪瘟病毒核酸快速检测方法的建立与应用 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2021年第37卷第5期

页      码：1119-1127页

摘      要：非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)引起的猪的一种急性、高度接触性传染病。本研究根据ASFV B646L、MGF360⁃14L和CD2v基因设计了3套引物和探针,建立了可同时鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR方法。结果表明,该法特异性强,可同时检测ASFV B646L、MGF360⁃14L和CD2v基因,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、猪A型塞内卡病毒等无交叉反应;两份ASFV MGF360⁃505R与CD2v基因联合缺失疫苗株DNA三重荧光PCR法检测结果都仅出现一条B646L扩增曲线,与预期一致;灵敏度高,该法对重组质粒pUC⁃B646L、pUC⁃360⁃14L和pUC⁃CD2v的检出限分别为1.572×10^(3)拷贝/mL、1.934×10^(3)拷贝/mL和1.929×10^(3)拷贝/mL,灵敏度比世界动物卫生组织(World organization for animal health,OIE)推荐的荧光PCR高10倍;重复性好,对三种重组质粒检测的Ct值批内和批间变异系数均小于2%;应用该法及OIE推荐的荧光PCR对1215份样品进行平行检测,结果显示23份样品为阳性,1192份样品为阴性,两种方法检测结果一致。本研究建立的方法能鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株(缺失MGF360⁃505R和/或CD2v基因),对将来基因缺失疫苗的推广应用及ASF疫情防控具有重要的意义。

主 题 词：非洲猪瘟病毒(ASFV) 基因缺失疫苗 荧光PCR 鉴别 检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004040

馆 藏 号：203104843...