重组人唾液淀粉酶A的制备及活性鉴定

作     者：刘洁 金科华 LIU Jie;JIN Ke-hua

作者机构：湖北科技学院护理学院湖北咸宁437100 湖北科技学院基础医学院 

基　　金：湖北省大学生课外创新项目(S201910927036) 湖北科技学院教学改革项目(2017XB010) 

出 版 物：《湖北科技学院学报（医学版）》 (Journal of Hubei University of Science and Technology(Medical Sciences))

年 卷 期：2021年第35卷第4期

页      码：292-294,F0003页

摘      要：目的利用基因工程制备重组人唾液淀粉酶A(rSAA),用其替代唾液中的SAA水解淀粉。方法设计一对带酶切位点的引物,PCR扩增SAA cDNA全长,将pET-28a质粒和PCR产物双酶切、连接。连接产物热激法转化大肠杆菌DH5α,于含卡那霉素的LB平板筛选抗性菌落,培养抗性菌落,抽提质粒,进行酶切和测序鉴定。将重组质粒(记为pS1)转化大肠杆菌BL21(DE3),用含卡那霉素的LB平板筛选抗性菌落(记为BL-pS1),培养BL-pS1,ITPG诱导rSAA表达。收集菌体,重悬于pH6.8的磷酸缓冲液,超声裂解,离心取上清,测试其水解淀粉的活性。结果构建了SAA cDNA的原核表达载体pS1,rSAA在宿主菌BL21(DE3)中获得可溶性表达,rSAA能高效水解淀粉。结论用rSAA取代唾液中SAA水解淀粉操作安全、取用方便、利于环保。

主 题 词：唾液淀粉酶A pET-28a质粒 淀粉 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16751/j.cnki.2095-4646.2021.04.0292

馆 藏 号：203104849...