牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗原区原核表达及反应原性鉴定

作     者：武春霞 周雅坪 郭婷 崔琦 王宇琛 田广原 思汗 孙衍立 郝永清 WU Chunxia;ZHOU Yaping;GUO Ting;CUI Qi;WANG Yuchen;TIAN Guangyuan;Sihan;SUN Yanli;HAO Yongqing

作者机构：内蒙古农业大学兽医微生物学与免疫学实验室呼和浩特010018 呼伦贝尔市动物疫病预防控制中心呼伦贝尔021000 内蒙古巴彦淖尔市临河区农牧业局巴彦淖尔015000 

基　　金：内蒙古自治区科技计划项目“牛羊重要疫病免疫与分子快速检测新技术研发”(2019GG240) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第48卷第9期

页      码：3438-3446页

摘      要：本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出G基因的核苷酸序列,分析其抗原区域,利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段,将目的片段连接到克隆载体pMD19-T后,对其进行双酶切鉴定和测序。将双酶切后的目的片段进行胶回收,构建重组质粒pET-32a-G,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用Ni-IDA亲和层析法纯化经IPTG诱导表达的蛋白,并测定其浓度;通过SDS-PAGE和Western blotting方法对该蛋白进行分析与鉴定。结果显示,本试验成功克隆出大小约为567 bp的G基因,获得分子质量约为40 ku的可溶性重组蛋白,优化诱导条件后用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定,在16℃、IPTG浓度1.2 mmol/L、诱导4 h时蛋白表达量最大;通过Western blotting检测发现,重组蛋白可与山羊源BRSV标准阳性血清发生特异性反应,说明该蛋白具有反应原性。综上,本研究成功表达并纯化了BRSV G蛋白,为建立BRSV抗体间接ELISA检测方法和BRSV亚单位疫苗的研制奠定了基础。

主 题 词：牛呼吸道合胞体病毒(BRSV) G蛋白 原核表达 可溶性表达 反应原性 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.09.036

馆 藏 号：203104853...