CRISPR-Cas9介导靶向突变拟南芥ERF 1-1基因

作     者：熊伟 朱成新 王玉婷 郑媛 刘琳 莫蓓莘 XIONG Wei;ZHU Chengxin;WANG Yuting;ZHENG Yuan;LIU Lin;MO Beixin

作者机构：深圳大学生命与海洋科学学院广东省植物表观遗传学重点实验室广东深圳518071 深圳大学龙华生物产业创新研究院广东深圳518110 深圳大学物理与光电工程学院光电子器件与系统教育部/广东省重点实验室广东深圳518060 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31870287) 深圳市基础研究计划资助项目(JCYJ20190808115005598) 

出 版 物：《深圳大学学报（理工版）》 (Journal of Shenzhen University(Science and Engineering))

年 卷 期：2021年第38卷第5期

页      码：504-509页

摘      要：利用CRISPR-Cas9基因编辑技术对拟南芥真核生物释放因子1-1(eukaryotic release factor 1-1,ERF 1-1)基因进行高效率的靶向突变以获得该基因突变体,观察突变体表型并进一步探索ERF1-1基因在拟南芥中生长发育中的功能.根据原间隔序列邻近模块序列(protospacer adjacent motif,PAM)的特异性,选择1对位于ERF1-1基因内部的靶点序列,并设计1对向导核糖核酸(guide ribonucleic acid,gRNA),将与这对gRNA序列碱基互补配对的脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)序列构建到pHEE401载体中.将构建好的重组质粒转化到农杆菌GV3101菌株,接着利用含有重组质粒的农杆菌对拟南芥花序进行滴花法侵染.用含有潮霉素的培养平板筛选转基因T1代阳性苗并传代培养,通过测序检测每一代植株靶点附近是否发生编辑.采用目前最有效的CRISPR/Cas9基因靶向编辑技术突变拟南芥ERF1-1基因,成功获得了一系列不同形式的ERF1-1基因突变植株,在正常生长条件下ERF1-1突变植株与野生型相比具有轻微的生长发育缺陷表型.根据erf1-1突变植株的表型推测ERF1基因家族的成员ERF1-1、ERF1-2和ERF1-3可能在功能上冗余.研究成果可为后续拟南芥ERF1基因功能研究提供遗传学方面的数据.

主 题 词：基因工程 蛋白质翻译 翻译终止 真核生物释放因子 CRISPR-Cas9基因编辑技术 拟南芥 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0802[工学-机械学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 0702[理学-物理学类] 0812[工学-测绘类] 

核心收录：

D　O　I：10.3724/SP.J.1249.2021.05504

馆 藏 号：203104878...