副猪嗜血杆菌主要免疫原性抗原的克隆表达及其反应原性的对比分析

作     者：戚百川 杨金钱 丁文文 马艳杰 李健 陈坤鹏 薛云 司丽芳 刘志军 赵战勤 QI Bai-chuan;YANG Jing-Qian;DING Wen-Wen;MA Yan-jie;LI Jian;CHEN Kun-Peng;XUE Yun;SI Li-fang;LIU Zhi-jun;ZHAO Zhan-qin

作者机构：河南科技大学动物科技学院/兽医生物制品工程实验室河南洛阳471023 河南科技大学动物科技学院/河南省高等学校环境与畜产品安全重点学科开放实验室河南洛阳471023 龙岩学院生命科学学院/福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室福建龙岩364012 

基　　金：国家自然科学基金项目(32072899、U1704117) 福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室开放基金课题项目(2019KF01) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第43卷第8期

页      码：880-884,889页

摘      要：为制备和筛选副猪嗜血杆菌(HPS)具有免疫保护效力的抗原因子重组蛋白,本研究根据GenBank中已登录HPS基因序列,设计引物,分别克隆其OapA、Hps0675(包括全片段和2个子片段)、Hsp60、OmpP2、HbpB、GAPDH、Hps06257和D15抗原因子的10个基因片段,分别将其克隆入pET28a质粒构建重组表达质粒并转化大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测结果显示,除OapA外,其他9个重组蛋白均正确表达,其表达量占菌体总蛋白的10.20%~31.90%。除rGAPDH以可溶性和包涵体两种形式表达外,其他8个重组蛋白均以包涵体形式存在。Western blot鉴定结果显示,rHbpB、rD15、rHps06257反应原性最强,rGAPDH、rHsp60、rOmpP2反应原性中等,r Hps0675-1、r Hps0675-2、rHps0675反应原性最弱。以His标签蛋白纯化试剂盒纯化后,9个重组蛋白的纯度在90.72%~98.72%,浓度在1.082 mg/mL~7.936 mg/mL。本研究实现了HPS 9个重要抗原因子的克隆表达和纯化,首次在相同条件下对其反应原性进行了对比分析,为其亚单位疫苗候选保护性抗原蛋白的筛选奠定基础。

主 题 词：副猪嗜血杆菌 免疫原性蛋白 表达 纯化 Western blot 

学科分类：090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.202012055

馆 藏 号：203104893...