慢病毒介导的Aggrecanase-1 shRNA转染体外培养的类风湿关节炎患者软骨细胞的研究

作     者：杜清峰 王英振 张海宁 刘英魁 杜明 程莉 王永 冯志强 张宝安 宋振 王宁 谭玉春 王亮 杜小卫 Du Qingfeng;Wang Yingzhen;Zhang Haining;Liu Yingkui;Du Ming;Cheng Li;Wang Yong;Feng Zhiqiang;Zhang Baoan;Song Zhen;Wang Ning;Tan Yuchun;Wang Liang;Du Xiaowei

作者机构：青岛大学附属医院关节外科266003 山东省平原县第一人民医院脊柱关节外科 

基　　金：国家自然科学基金(81171774 81272056) 

出 版 物：《中华风湿病学杂志》 (Chinese Journal of Rheumatology)

年 卷 期：2015年第19卷第1期

页      码：36-41,F0003页

摘      要：目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰在软骨细胞的可行性,确定是否可以通过抑制软骨细胞中Aggrecanase-1的表达实现对软骨中Aggrecan的保护作用.方法 将设计并构建的shRNAAggrecanase-1慢病毒表达载体转染进RA患者关节软骨细胞.通过荧光定量PCR检测转染后不同时间点不同转染复数下Aggrecanase-1及Aggrecan mRNA水平的变化;通过免疫细胞化学方法测定各组Aggrecan蛋白水平表达量的变化,所有数据利用SPSS 19.0软件,采用配对t检验及方差分析进行统计分析.结果 由慢病毒介导的RNA干扰中,随着Aggrecanase-1 mRNA表达水平显著下降,Aggrecan mRNA 和蛋白表达也相应地增加,特别是shRNA4组变化较为显著,其中Aggrecanase-1 mRNA由开始的1.083±0.133降为0.074±0.004（t=35.71,P＜0.05）;Aggrecan mRNA由开始的1.182±0.160增加到2.922±0.169 （t=19.43,P＜0.01）;同时Aggrecan蛋白多糖由开始的507±265增加到2 270±334（t=11.43,P＜0.05）.结论 由慢病毒介导的RNA干扰可以实现对Aggrecanase-1表达的抑制,且对软骨细胞的表型和生长速度没有负面影响;慢病毒介导的RNA干扰可以通过抑制Aggrecanase-1的表达实现对Aggrecan的保护,是一种缓解软骨退化的有效途径.

主 题 词：软骨细胞 RNA干扰 蛋白聚糖蛋白酶-1 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1007-7480.2015.01.008

馆 藏 号：203104944...