苏云金芽孢杆菌沉默基因cry2Ab3在大肠杆菌中表达及杀虫活性研究

作     者：陈中义 李长友 刘加宝 张杰 黄大昉 Chen Zhongyi 1 Li Changyou 1 Liu Jiabao 1 Zhang Jie 1 Huang Dafang 1,2( 1State Key Lab for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, CAAS, Beijing 100094, China) ( 2Biotechnology Research Institute, CAAS, Bei

作者机构：中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100094 中国农业科学院生物技术研究所北京100081 

基　　金：国家转基因植物研究与开发产业化专项课题 (J99 A 0 33)~~ 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2002年第42卷第5期

页      码：561-566页

摘      要：对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。根据大肠杆菌T7表达载体pET 2 1b克隆位点和cry2Ab3开放阅读框架 (ORF)两端序列 ,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3 ,高保真PCR扩增获得cry2Ab3完整ORF ,经酶切、连接构建了重组表达质粒pET 2Ab3。表达质粒导入大肠杆菌BL2 1 (DE3 ) ,IPTG诱导后 ,SDS PAGE电泳证实了cry2Ab3的表达。生物测定显示诱导培养物对棉铃虫初孵幼虫和小菜蛾二龄幼虫具有杀虫活性 ,能明显抑制二化螟二龄幼虫生长 ,但对甜菜夜蛾和玉米螟没有明显活性。进一步提取Cry2Ab3蛋白 ,生测结果表明其对棉铃虫LC50 为 3 2 5 5 μg g。

主 题 词：苏云金芽孢杆菌 沉默基因 Cry2Ab3 大肠杆菌 表达 杀虫活性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0001-6209.2002.05.008

馆 藏 号：203104974...