人类白细胞抗原-G5过表达慢病毒载体的构建以及JAR-HLA-G5稳转细胞株的建立

作     者：曹维维 袁成良 CAO Wei-wei;YUAN Cheng-liang

作者机构：成都中医药大学医学技术学院四川成都611137 德阳市人民医院检验科四川德阳618000 

出 版 物：《中国临床药理学杂志》 (The Chinese Journal of Clinical Pharmacology)

年 卷 期：2021年第37卷第18期

页      码：2495-2498页

摘      要：目的构建过表达人类白细胞抗原G5(HLA-G5)慢病毒载体,筛选建立稳定表达HLA-G5的JAR稳转细胞株。方法根据HLA-G5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片段。将目的基因定向接入经BamHI/AgeI酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒GV492-HLA-G5。筛选阳性克隆和测序鉴定后,使用三质粒包装系统将含有目的基因的重组质粒GV492-HLA-G5和辅助包装质粒共转染至293T细胞进行病毒包装及纯化并测定病毒滴度。设置过表达实验(OE)组和阴性对照(NC)组,在感染复数为20的条件下感染JAR细胞。用荧光显微镜观察各组绿色荧光蛋白的表达情况。用浓度为2μg·mL^(-1)嘌呤霉素筛选出稳定表达HLA-G5的JAR细胞株。用qRT-PCR和Western blot法检测JAR细胞中HLA-G5的mRNA和蛋白表达水平。结果经PCR及测序鉴定证明,序列与设计序列一致,成功构建重组慢病毒载体。病毒滴度结果显示,OE组的滴度为2×108TU·mL^(-1),NC组的滴度为4×108TU·mL^(-1)。qRT-PCR显示OE组JAR细胞中HLA-G5的mRNA(108.69±4.25)表达水平较NC组(1.00±0.76)明显增高(P<0.01)。Western blot显示OE组JAR细胞中HLA-G5的蛋白(65.84±14.11)表达水平较NC组(1.35±0.37)明显升高(P<0.01)。结论成功构建HLA-G5慢病毒载体并筛选建立JAR-HLA-G5稳转细胞株。

主 题 词：人类白细胞抗原G5 慢病毒载体 人绒毛膜癌细胞 类风湿关节炎 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13699/j.cnki.1001-6821.2021.18.028

馆 藏 号：203105020...