靶向小鼠 Tyr 基因的CRISPR/Cas9系统构建及打靶效力分析

作     者：岳鹏鹏 杨光宇 王添贤 付灿 肖义然 于鸿浩 YUE Pengpeng;YANG Guangyu;WANG Tianxian;FU Can;XIAO Yiran;YU Honghao

作者机构：桂林医学院生物技术学院桂林541199 桂林医学院公共卫生学院桂林541199 北京体育大学运动人体科学学院北京100084 

基　　金：国家自然科学基金项目(31860302) 广西自然科学基金项目(2018JJA140455) 广西中青年教师能力提升项目(2018KY0399) 

出 版 物：《生物学杂志》 (Journal of Biology)

年 卷 期：2021年第38卷第5期

页      码：34-38,65页

摘      要：TYR基因编码酪氨酸酶,该基因变异影响黑色素的生成,是人类白化病的遗传学病因。研究利用OMIM、ExAC和ClinVar等数据库筛查人TYR基因的强致病突变位点,并通过蛋白序列比对分析将该位点定位于小鼠基因组上,然后基于定位位点的DNA序列和CRISPR/Cas9系统基因打靶的原理设计了3个向导RNA(small guide RNA,sgRNA)。通过sgRNA表达载体的构建、N2a细胞的共转染、药物筛选、PCR产物测序,以及TA克隆测序分析等实验步骤完成了3个sgRNA的打靶效力分析。TA克隆测序分析结果显示3个位点均发生了碱基的随机插入或缺失突变,突变效率均为100%,表明研究成功构建了高效的靶向小鼠Tyr基因,并可模拟人类白化病强致病突变的CRISPR/Cas9基因编辑系统,为进一步制备Tyr基因工程小鼠,深入研究Tyr基因变异的致病机制和探寻可靠治疗手段奠定了基础。

主 题 词：白化病 Tyr基因 基因编辑 CRISPR/Cas9 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.2095-1736.2021.05.034

馆 藏 号：203105124...