牛多瘤病毒PCR检测方法的建立及验证

作     者：牛步青 胡术然 高有 张海浩 陈蕾西 常亚军 易力 姚宇峰 任芳芳 NIU Bu-qing;HU Shu-ran;GAO You;ZHANG Hai-hao;CHEN Lei-xi;CHANG Ya-jun;YI Li;YAO Yu-feng;REN Fang-fang

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650503 

基　　金：云南省科技厅创新人才计划(2019HC006) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2021年第34卷第10期

页      码：1232-1235,1242页

摘      要：目的建立牛多瘤病毒(bovine polyomavirus,BPyV)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据NCBI中登录的BPyV主要衣壳蛋白基因序列(BPyV_gp4 VP1,NC_001442.1)设计2对引物:9PF、9PR和3PF、3PR。合成BPyV主要衣壳蛋白基因序列,并与pUC57质粒构建重组质粒。以重组质粒为模板进行PCR扩增,优化退火温度。验证方法的灵敏度及特异性,并使用该方法对Vero、MDBK、KMB17和BT细胞的培养上清液进行检测。结果建立的PCR法可以BPyV-frag重组质粒为模板扩增出特异性条带,最适退火温度为60℃。2对引物的灵敏度均达2 fg/μL(558 copies/μL),引物对9PF、9PR的灵敏度略高于3PF、3PR;引物3PF、3PR和9PF、9PR以高浓度的BPV DNA(101.6 ng/μL)和BAV DNA(97.5 ng/μL)为模板时,均无扩增条带,微量BPyV-frag重组质粒产生扩增条带。Vero、MDBK、KMB17和BT细胞培养上清液中均未检出BPyV。结论成功建立了BPyV的PCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,可用于检测细胞培养上清液中的BPyV。

主 题 词：牛多瘤病毒 聚合酶链反应 细胞培养上清液 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.003454

馆 藏 号：203105150...