表达荧光蛋白卡介苗菌株的构建与应用及其qPCR定量方法的建立

作     者：崔佳 温炟 孙燚 杨国凤 吴长新 CUI Jia;WEN Da;SUN Yi;YANG Guo-feng;WU Chang-xin

作者机构：山西大学生物医学研究院化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西太原030006 长治医学院微生物学教研室山西长治046000 

基　　金：国家科学技术部重大研发项目子课题“禽畜重要胞内菌基因调控及其与宿主互作的分子机制研究”项目(No.2017YFD0500303) 长治医学院春晖计划项目(No.QDZ201906) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2021年第16卷第9期

页      码：997-1000,1007页

摘      要：目的构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)菌株,并建立快速定量BCG细菌数的qPCR方法。方法电转化构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的BCG菌株,比较其与野生菌株的生长曲线。将此荧光蛋白标记的BCG感染人源单核巨噬细胞系THP1细胞,用共聚焦显微镜观察感染吞噬效果。基于BCG 16SrRNA序列设计特异性引物,应用qPCR定量检测BCG细菌基因组DNA,根据细菌平板计数菌落数与qPCR循环数绘制标准曲线,建立qPCR定量BCG细菌数的方法。结果构建的荧光蛋白标记BCG菌株荧光信号强,生长曲线与野生菌株基本一致,共聚焦显微镜观察细菌感染细胞后呈现良好荧光效果。建立的qPCR检测方法能定量检测BCG细菌数量,重复试验中组内和组间的变异系数均小于3%。结论构建的卡介苗菌株稳定表达荧光蛋白。建立的qPCR方法重复性好,可用于对BCG菌株的快速计数。

主 题 词：卡介苗 荧光蛋白 qPCR 定量细菌数 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13350/j.cjpb.210902

馆 藏 号：203105236...