稳定高表达RORα基因的人胃癌MGC803细胞系的构建与鉴定

作     者：赵晓红 向姝霖 刘芳 夏红 曾希 苏波 凌晖 苏琦 

作者机构：南华大学肿瘤研究所湖南省胃癌研究中心湖南省高校肿瘤细胞与分子病理学重点实验室湖南衡阳421001 海南省妇幼保健院妇产科 怀化市第一人民医院肿瘤科 

基　　金：国家自然科学基金(81374013 81102854) 湖南省高校创新平台开放基金(09K074) 湖南省卫计委科研课题(B2015-182) 

出 版 物：《中南医学科学杂志》 (Medical Science Journal of Central South China)

年 卷 期：2016年第44卷第1期

页      码：5-10页

摘      要：目的构建维甲酸相关孤核受体α(RORα)基因的真核表达载体,并建立稳定高表达RORα的人胃癌MGC803细胞,为研究RORα的功能奠定基础。方法根据RORα基因的c DNA全序列,设计一对带有限制性酶切位点的引物。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成RORαc DNA第一链,并用上述引物扩增目的基因全序列,然后经双酶切插入到真核表达载体pc DNA3.1(+),转化大肠杆菌DH5α;用氨苄青霉素筛选pc DNA3.1(+)-RORα的阳性菌株,双酶切和测序进行鉴定。用经鉴定的重组质粒pc DNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞,G418筛选获得RORα/MGC803细胞株;Real-time PCR和Western blot检测该细胞株RORα的表达情况。结果经双酶切鉴定,构建的真核表达载体pc DNA3.1(+)-RORα包含有大约1 640 bp的插入片段,与预期大小一致;表达载体经测序鉴定,其插入片段碱基序列与RORα基因的c DNA序列完全一致。用构建的真核表达载体pc DNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞后,筛选到可稳定传代的RORα/MGC803细胞株。Real-time PCR与Western blot检测显示,RORα/MGC803细胞RORαmRNA和蛋白表达增高。结论成功构建真核表达载体pc DNA3.1(+)-RORα和建立高表达RORα基因的RORα/MGC803细胞。

主 题 词：维甲酸相关孤核受体α 真核表达 转染 人胃癌MGC803细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.01.002

馆 藏 号：203105360...