siRNA对鼠成纤维细胞株中HSP47表达的抑制作用

作     者：李琳 王佐林 LI Lin;WANG Zuo-lin

作者机构：同济大学附属口腔医院口腔颌面外科上海200072 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(30471905) 上海市科委科研计划项目(044119648 05PJ14097) 

出 版 物：《口腔颌面外科杂志》 (Journal of Oral and Maxillofacial Surgery)

年 卷 期：2006年第16卷第3期

页      码：199-204页

摘      要：目的:构建小鼠热休克蛋白47(47 kDa heat shock protein,HSP47)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,及HSP47第一外显子克隆表达载体,观察其在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞株)中对HSP47基因表达的抑制作用。方法:针对小鼠HSP47的mRNA序列,在368、718位点分别设计两对21nt的,编码HSP47siRNA基因片断的寡核苷酸,退火成双链后将其连接到pSilencer1.0质粒的U6启动子下游,构建pSilencer-HSP47siRNA重组质粒;同时构建HSP47第一外显子重组质粒。经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染方法,转入NIH3T3细胞,用半定量RT-PCR法检测HSP47表达水平的变化。结果:经酶切、测序鉴定,成功构建了siRNA真核表达载体及靶基因克隆表达载体。经脂质体转染NIH3T3细胞后,RT-PCR显示NIH3T3细胞中HSP47基因的mRNA表达水平明显降低,所构建的HSP47-siRNA基因的真核表达载体,成功地抑制了目的基因的表达。结论:构建的小鼠HSP47基因的RNA干扰真核表达载体pSilencer-HSP47siRNA,在NIH3T3细胞中有效地发挥了对HSP47基因表达的干涉作用,从而提示HSP47特异的siRNA具有抑制皮肤瘢痕形成的潜力。

主 题 词：热休克蛋白47 小干扰RNA 细胞转染 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100101[100101] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-4979.2006.03.002

馆 藏 号：203105511...