Fonsecaea monophora聚酮合酶基因的CRISPR-Cas9敲除载体的构建

作     者：李敏英 黄欢 李倩 骆明芬 王晓悦 刘红芳 曾维英 席丽艳 LI Minying;HUANG Huan;LI Qian;LUO Mingfen;WANG Xiaoyue;LIU Hongfang;ZENG Weiying;XI Liyan

作者机构：南方医科大学皮肤病医院实验研究中心广州510091 中山大学孙逸仙纪念医院皮肤科广州510120 

基　　金：国家自然科学基金(81873960) 国自然青年科学基金(81601746) 广东省医学科学技术研究基金(A2019345) 

出 版 物：《中国真菌学杂志》 (Chinese Journal of Mycology)

年 卷 期：2021年第16卷第5期

页      码：303-307,313页

摘      要：目的改造pFC332质粒,简化实验流程,构建Fonsecaea monophora PKS1基因的CRISPR-Cas9敲除载体。方法设计引物PCR扩增pFC334质粒上的gRNA骨架,获得已经插入AarⅠ酶切位点的gRNA骨架片段后,使用PstI和MerI酶线性化pFC334载体,构建pFC334-AarⅠ载体,使用MreⅠ和BglⅡ酶对其和pFC332质粒进行双酶切,连接后获得pFC332-gRNA-AarⅠ载体,设计gRNA,最后将各片段插入到载体中。结果测序得到16533bp大小的改造后的pFC332-gRNA-AarⅠ质粒,构建了PKS1基因的CRISPR-Cas9敲除载体,通过PCR,酶切以及测序的方法确定敲除载体构建成功。结论成功构建Fonsecaea monophora聚酮合酶基因的CRISPR-Cas9敲除载体,为研究PKS1基因及DHN-黑素在Fonsecaea monophora的生物学功能奠定了良好的基础。

主 题 词：Fonsecaea monophora 聚酮合酶基因 CRISPR-Cas9 载体构建 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203105758...