与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基C端相互作用的新蛋白的酵母双杂交筛选

作     者：李靓 崔柳青 王瑞莉 毛丽红 韩康 柴丹丹 薛乐勋 LI Liang;CUI Liuqing;WANG Ruili;MAO Lihong;HAN Kang;CHAI Dandan;XUE Lexun

作者机构：郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州450001 河南工业大学生物工程学院郑州450001 

基　　金：国家自然科学基金资助项目30700014 科技部国际科技合作基金资助项目2007DFA01240 

出 版 物：《郑州大学学报（医学版）》 (Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences))

年 卷 期：2013年第48卷第1期

页      码：24-27页

摘      要：目的:用酵母双杂交的方法筛选与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基(FLA8)C端相互作用的蛋白。方法:设计特异性引物(上下游分别引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点),扩增FLA8C端(433个氨基酸)cDNA,与穿梭载体pGBKT7连接以构建诱饵表达载体,然后转化酵母菌株Y187和AH109,Westernblot法检测诱饵蛋白在转化酵母菌株内的表达。通过自激活实验和毒性实验检测诱饵表达载体是否适合利用酵母双杂交的方法筛选相互作用蛋白。转化诱饵质粒的酵母菌株Y187与AH109(文库菌)杂交,待三叶形合子形成后用营养缺陷型培养基和α-半乳糖苷酶活性实验筛选阳性克隆,并对阳性克隆进行测序。结果:成功构建了pGBKT7-FLA8-C双杂交诱饵载体;经检测该载体的表达产物对Y187和AH109均无自激活和毒性作用,可用于酵母双杂交实验;杂交后筛选得到2个阳性克隆,测序结果显示为鞭毛结合蛋白107(FAP107)和含蛋白结合结构域的预测蛋白。结论:成功筛选得到了与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基C端相互作用的蛋白,分别为FAP107和预测蛋白。

主 题 词：酵母双杂交 驱动蛋白Ⅱ 信号传导 鞭毛内运输 杜氏盐藻 

学科分类：1003[医学-口腔医学类] 100302[100302] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-6825.2013.01.006

馆 藏 号：203105780...