鸭坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

作     者：王巧萍 严红亚 李珂 朱鹤然 元正菊 常志顺 张以芳 信爱国 Wang Qiaoping;Yan Hongya;Li Ke;Zhu Heran;Yuan Zhengju;Chang Zhishun;Zhang Yifang;Xin Aiguo

作者机构：云南农业大学动物医学院云南昆明650201 云南省畜牧兽医科学院养禽与禽病研究所云南昆明650224 

基　　金：国家现代农业产业技术(水禽)体系资助项目(CARS-42) 云南省廖明专家工作站(202105AF150077) 云南省重大科技专项(202102AE090029) 

出 版 物：《中国动物检疫》 (China Animal Health Inspection)

年 卷 期：2021年第38卷第11期

页      码：124-130页

摘      要：为建立鸭坦布苏病毒(duck tembusuvims,DTMUV)荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制标准曲线,用SYBRGreenI法检测MGB探针法qRT-PCR的引物是否有非特异性扩增,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样品检测。结果显示:MGB探针法qRT-PCR标准曲线的相关系数为0.999 3,其引物没有非特异性扩增;对于其他阳性样本,如鸭肝炎病毒(DHV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)等抗原无扩增曲线,只能检出DTMUV;qRT-PCR敏感性可达3×10^(2) copies/μL,是普通RT-PCR的10 000倍;批内和批间重复性试验变异系数(CV)为0.08%~0.49%,均小于0.5%。从云南省不同地区采集20份临床出现产蛋下降症状的病鸭组织,应用试验建立的qRT-PCR方法检出12份阳性样品,而普通RT-PCR检出10份,两者的阳性率分别为60% (12/20)和50% (10/20)。结果表明,本试验成功建立了基于DTMUV NS5基因的MGB探针qRT-PCR检测方法,其标准曲线线性关系显著,特异性强,与其他禽源性病原无交叉反应性,敏感性和重复性良好,敏感性和阳性检出率较普通RT-PCR高,更适合于DTMUV感染的临床诊断和流行病学调查。

主 题 词：鸭坦布苏病毒 NS5基因 荧光定量RT-PCR MGB探针 

学科分类：090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-944X.2021.11.021

馆 藏 号：203105787...