Anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体的纯化与活性

作     者：徐舒怡 李雅贤 胡海 张莉 边延林 朱建伟 吴明媛 XU Shuyi;LI Yaxian;HU Hai;ZHANG Li;BIAN Yanlin;ZHU Jianwei;WU Mingyuan

作者机构：上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心上海200240 上海交通大学分析测试中心上海200240 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.81773621) 转化医学国家重大科技基础设施(上海)开放课题基金资助项目(No.TMSK-2020-131) 

出 版 物：《中国药科大学学报》 (Journal of China Pharmaceutical University)

年 卷 期：2021年第52卷第5期

页      码：622-629页

摘      要：针对细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)和CXC趋化因子受体4型(CXCR4)两个靶点,设计anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体的基因序列,C末端连接组氨酸标签(6×His标签),通过pET-22b(+)重组表达质粒转化大肠埃希菌*** BL21,经IPTG诱导表达,以可溶性形式存在于菌体裂解上清液。为了提高双特异性纳米抗体的产量和纯度,采用3种不同的方法进行样品制备和纯化。结果表明,通过机械裂菌并改进缓冲液的盐离子和咪唑浓度以及pH,经His Trap FF亲和色谱柱纯化后,对双特异性纳米抗体分离效果较好,目的蛋白产量超过1 mg/L,纯度可达到97%。同时,anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体能够与细胞表面两个抗原特异性结合,增强IL-2活化的人外周血单个核细胞(PBMC)对胰腺癌细胞株AsPC-1的杀伤能力,为其后续体内药效学评价奠定了基础。

主 题 词：双特异性 纳米抗体 亲和色谱 蛋白纯化 生物学活性 

学科分类：1007[医学-药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100706[100706] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.11665/j.issn.1000-5048.20210516

馆 藏 号：203105839...