尼泊尔黄堇G6PDH蛋白基因的异源表达及蛋白纯化

作     者：任玉玲 孙胜男 王伊慧 赵成周 李萍 Ren Yuling;Sun Shengnan;Wang Yihui;Zhao Chengzhou;Li Ping

作者机构：青海大学生态环境工程学院西宁810016 青海大学藏医学院西宁810016 

基　　金：国家自然科学基金地区项目(31660063) 青海科技厅基础研究项目(2017-ZJ-950Q) 教育部春晖计划项目(Z2017056) 海南藏族自治州科技计划项目“海南州野生甘蒙锦鸡儿驯化研究”共同资助 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2021年第19卷第20期

页      码：6708-6715页

摘      要：大量研究表明葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PDH)在响应生物和非生物胁迫方面具有重要作用,为进一步研究珍贵濒危藏药材尼泊尔黄堇对极端环境的适应性,本研究根据尼泊尔黄堇转录组信息设计ChG6PDH扩增引物,利用PCR克隆获得ChG6PDH基因,构建原核表达载体ChG6PDH-pMAL-C2x,将其导入大肠杆菌BL21菌株诱导表达,利用亲和层析法对重组蛋白进行纯化,并用6-磷酸葡萄糖为底物在37℃对其进行体外酶活力检测。结果表明,重组可溶性蛋白最佳诱导条件为0.5 mmol/L的异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37℃诱导5 h,SDS-PAGE和Western Blot检测纯化的酶蛋白,发现ChG6PDH蛋白分子量为60 kD。体外活性测定表明MPB-ChG6PDH蛋白具有G6PDH酶催化能力,酶活力是3228 nmol·min^(-1)·mg^(-1)prot。该研究结果为尼泊尔黄堇G6PDH酶蛋白的功能研究提供基础。

主 题 词：尼泊尔黄堇(Corydalis hendersonii Hemsl.) G6PDH蛋白 原核表达 蛋白纯化 蛋白质印迹法 

学科分类：1008[医学-中药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.13271/j.mpb.019.006708

馆 藏 号：203106035...