青稞条纹病LAMP检测体系的建立

作     者：胡章薇 杨帆 张学飞 刘耀霞 闫佳会 侯璐 郭青云 姚强 HU Zhangwei;YANG Fan;ZHANG Xuefei;LIU Yaoxia;YAN Jiahui;HOU Lu;GUO Qingyun;YAO Qiang

作者机构：青海大学农林科学院青海省农业有害生物综合治理重点实验室/农业农村部西宁作物有害生物科学观测实验站青海西宁810016 

基　　金：青海省基础研究计划项目(2020-ZJ-748) 青海省重点实验室项目(2020-ZY-Y11) 

出 版 物：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 (Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2021年第49卷第11期

页      码：105-114页

摘      要：【目的】建立青稞条纹病的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测体系,为青稞种子带菌检测及其条纹病的有效防控提供参考。【方法】根据麦类核腔菌(Pyrenophora graminea)的ITS-rDNA序列区间设计5组引物,从中筛选特异性引物,并通过设置60,61,62,63,64和65℃6个温度梯度来优化LAMP反应体系的温度,以建立高效检测麦类核腔菌的LAMP技术体系;分别以麦类核腔菌、大麦坚黑粉菌、裸黑粉菌、禾生指葡孢霉、细链格孢和禾谷镰孢菌基因组DNA为模板进行LAMP扩增反应,对该体系的特异性进行检测;以310,31,3.1,0.31,0.031和0.0031 pg/μL的麦类核腔菌基因组DNA为模板,对该体系的灵敏度进行分析;最后利用该体系对肚里黄、柴青1号、1141、北青9号和昆仑15等5个青稞主栽品种的种子带菌率进行检测。【结果】青稞条纹病LAMP检测体系的特异性引物为引物组2,最佳反应温度63℃,反应时间70 min;该检测体系对麦类核腔菌具有良好的特异性,其最低检测限为0.31 pg/μL;肚里黄、柴青1号、1141、北青9号和昆仑15种子的带菌率分别为68.18%,72.73%,100%,77.27%和68.18%。【结论】建立了青稞条纹病LAMP检测体系,该体系能在63℃、70 min内检测出青稞种子是否携带条纹病菌。

主 题 词：青稞条纹病 环介导等温扩增 LAMP检测体系 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 090402[090402] 

核心收录：

D　O　I：10.13207/j.cnki.jnwafu.2021.11.014

馆 藏 号：203106045...