鸭甲型肝炎病毒1型与3型双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：林梦舟 吴双 徐建生 谢军 吴植 姜勇 朱善元 LIN Mengzhou;WU Shuang;XU Jiansheng;XIE Jun;WU Zhi;JIANG Yong;ZHU Shanyuan

作者机构：扬州大学兽医学院扬州225009 江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室泰州225300 江苏立华牧业股份有限公司常州213000 

基　　金：江苏高校“青蓝工程”项目[苏教师函(2020)10号] “六大人才高峰”项目(NY-009) 江苏省农业科技自主创新资金项目[CX(18)1004] 江苏省高校优秀科技创新团队项目[苏教科函(2019)7号] 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2021年第52卷第11期

页      码：3149-3156页

摘      要：旨在建立一种针对鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)的高效快速、高灵敏度和高特异性的双重TaqMan实时荧光定量PCR(q-PCR)检测方法并应用于临床疑似样品检测。根据DHAV-1和DHAV-3的VP1基因保守区域,分别设计合成了2对特异性引物和探针,在此基础上建立并优化了双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示:优化后标准曲线的相关系数(R2)均在0.999以上,扩增效率(E)在105%~110%,其组内变异系数(i-CV)与组间变异系数(c-CV)均在0.77%以下。运用双重q-PCR方法对不同稀释度的混合质粒与病毒核酸进行检测,结果表明,建立的双重TaqMan q-PCR特异性高;同时检测DHAV-1和DHAV-3的灵敏度均可达10个拷贝,分别是常规PCR方法的1000倍和100倍。对40份来自苏中、苏北地区的疑似鸭肝炎病毒感染的鸭组织病料进行检测,结果表明,q-PCR方法检出36份阳性病料,阳性率为90%;而常规PCR方法未能检出高Ct值的样品,阳性率为72.5%(29份阳性病料)。建立的双重TaqManq-PCR检测方法为DHAV-1与DHAV-3的临床样品检测提供了高效、灵敏、特异的工具,推动了临床分子流行病学调查及病毒定量分析等研究。

主 题 词：1型鸭肝炎病毒 3型鸭肝炎病毒 鸭病毒性肝炎 实时荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2021.011.016

馆 藏 号：203106271...