黑曲霉多聚半乳糖醛酸酶AnPGA耐热性和酶活性的定向改造

作     者：颜佳超 曹瑜 杨丹妮 吴勇 徐辉 乔代蓉 曹毅 YAN Jiachao;CAO Yu;YANG Danni;WU Yong;XU Hui;QIAO Dairong;CAO Yi

作者机构：四川大学生命科学学院微生物与代谢工程四川省重点实验室成都610065 四川大学实验室及设备管理处成都610065 

基　　金：四川省科技厅项目(2020YFH0076) 成都市科技局项目(2020-GH02-00037-HZ)资助 

出 版 物：《应用与环境生物学报》 (Chinese Journal of Applied and Environmental Biology)

年 卷 期：2021年第27卷第5期

页      码：1304-1310页

摘      要：果胶是一种蕴藏丰富的生物质资源,多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)是降解果胶的关键酶,在食品领域也有很广泛的应用,其酶活性和耐热性是制约果胶及其自身利用的关键.采用PoPMuSiC工具结合分子动力学模拟对Aspergillus niger SC323来源的多聚半乳糖醛酸酶AnPGA进行改进,预测影响解折叠自由能显著的位点结合柔性位点的策略,旨在提高其耐热性或酶活性.通过重叠PCR进行定点突变,并构建突变体的表达载体,电转化Pichia pastoris GS115后,进行诱导表达,成功筛选到酶活力和热稳定性均提高的突变体D73P,其最大反应速度是野生型的2.72倍,在65℃下的半衰期t_(1/2)比野生型增加了7 min,在65℃下处理30 min后的残余酶活性为野生型的1.86倍.本研究利用PoPMuSiC结合分子动力学模拟的设计策略提高了AnPGA的酶活力和耐热性,为工业应用提供了新的酶资源,也为其他工业酶的定向改造提供了参考.

主 题 词：多聚半乳糖醛酸酶 定向改造 定点突变 热稳定性 酶活性 

学科分类：0832[0832] 08[工学] 083201[083201] 

核心收录：

D　O　I：10.19675/j.cnki.1006-687x.2019.06013

馆 藏 号：203106281...