产气巴氏杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：李富祥 朱凤琼 高华峰 赵文华 邵庆勇 洪琼花 杨仕标 LI Fu-xiang;ZHU Feng-qiong;GAO Hua-feng;ZHAO Wen-hua;SHAO Qing-yong;HONG Qiong-hua;YANG Shi-biao

作者机构：云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 陆良县动物疾病预防控制中心云南陆良655600 云南省畜牧兽医科学院云南省畜禽遗传资源保护和种质创新工程实验室云南昆明650224 

基　　金：云南省创新人才计划项目(2017HB090) 云南省重大科技专项计划(202102AE090039) 云南省农业厅畜禽种质创新及标准化养殖技术推广专项 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第43卷第10期

页      码：1063-1067页

摘      要：为建立产气巴氏杆菌(***)的快速检测方法,本研究根据*** 16S rRNA基因的保守序列设计引物及TaqMan探针,并优化反应体系和反应条件,建立了*** TaqMan荧光定量PCR检测方法。建立的TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线结果显示,质粒标准品在4.7×10^(6)拷贝/μL~4.7×10^(1)拷贝/μL和Ct值之间的线性关系良好,相关系数R2为0.992,扩增效率为98.29%。利用建立的TaqMan荧光定量PCR方法对***、溶血性曼氏杆菌、大肠杆菌和肠炎沙门氏菌等36种常见猪、牛、羊细菌病原检测均为阴性结果,特异性强;该方法对重组质粒标准品pMD19-PA的最低检测限为47拷贝/μL,敏感性高;该方法批内、批间重复性试验的变异系数在1.58%~2.55%,重复性好。利用建立的TaqMan荧光定量PCR和细菌分离方法对46份流产猪、牛和羊胎儿的样品进行***检测,结果显示前者的阳性检出率为23.91%(11/46),传统分离方法的阳性率为15.22%(7/46),两种方法总符合率为91.30%。本研究首次建立***的荧光定量PCR检测方法,为猪、牛和羊***的感染提供了敏感、快速和高通量检测方法。

主 题 词：产气巴氏杆菌 TaqMan荧光定量PCR 检测 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.202103057

馆 藏 号：203106300...