新型抗uPAR人源化抗体的表达和活性检测

作     者：孙梦梅 靳彦文 李平 曹诚 张部昌 SUN Meng-mei;JIN Yan-wen;LI Ping;CAO Cheng;ZHANG Bu-chang

作者机构：安徽大学生命科学学院合肥230039 军事医学科学院生物工程研究所北京100850 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2011年第35卷第4期

页      码：258-261页

摘      要：目的制备抗尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）人源化抗体并初步检测它们与抗原的亲和能力。方法通过计算机辅助设计的结果,合成新型抗uPAR抗体的轻链和重链可变区基因序列,通过重叠PCR方法,拼接成完整的轻链和重链基因并克隆入pIRES双向表达载体。瞬时转染293T细胞,收取细胞上清,rProtein A亲和层析法纯化目的抗体,并进行SDS-PAGE和免疫印迹鉴定,采用Biacore3000技术检测抗体与抗原的结合能力。结果成功构建5种表达载体S1~S5,纯化的抗体在还原SDS-PAGE中表现为相对分子质量约为25×103和55×103两条带;免疫印迹分析表明,该人源化抗体可与羊抗人IgG特异性结合。Biacore3000实验结果表明,S2、S4和S5抗体与抗原具有良好的亲和活性,且亲和活性分别为1.74×10-8,1.49×10-8和1.05×10-8mol/L。结论成功构建并表达了5种抗uPAR人源化抗体,其中S2、S4和S5具有良好的抗原结合能力。

主 题 词：受体 尿纤溶酶原激活物 人源化抗体 瞬时表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-9960.2011.04.005

馆 藏 号：203106400...