沙门氏菌耐药基因的核酸恒温扩增快速检测

作     者：赵雪 梁祖源 张琛 王倬 毛瑞 刘雪莲 杜昱光 ZHAO Xue;LIANG Zu-yuan;ZHANG Chen;WANG Zhuo;MAO Rui;LIU Xue-lian;DU Yu-guang

作者机构：中国科学院过程工程研究所/生化工程国家重点实验室北京100190 中科芯瑞(苏州)生物科技有限公司江苏苏州215152 饲用微生物工程国家重点实验室北京大北农科技集团股份有限公司北京100192 

基　　金：国家重点研发计划项目(2018YFC0840401) 北京市科技计划项目(Z181100009318007) 

出 版 物：《沈阳农业大学学报》 (Journal of Shenyang Agricultural University)

年 卷 期：2021年第52卷第5期

页      码：548-556页

摘      要：为了解猪源致病性沙门氏菌的耐药状况,建立一种可以快速准确灵敏的确定沙门氏菌耐药表型的检测方法,以满足生产中的实时检测监控及用药指导的需求。所开发的检测方法基于竞争性互补介导核酸恒温扩增(competitive annealing mediated isothermal amplification,CAMP)与微流控芯片于一体的检测技术,分别以β-内酰胺类耐药基因bla_(TEM-1),四环素类耐药基因tetB,氨基糖苷类耐药基因aadA1,这些基因的保守区域片段为靶序列,应用CAMP引物设计推荐规则,设计特异性CAMP引物,通过条件优化建立一种快速检测沙门氏菌耐药基因的方法,并且对该方法的特异性及灵敏度等方面进行了评估。结果表明:所开发的CAMP检测体系可有效检出沙门氏菌,并检测养殖场所实地采集的沙门氏菌不同菌株中bla_(TEM-1)、tetB、aadA1共3种耐药基因,检测结果与测序结果一致,显示出良好的特异性。并且应用本试验建立的CAMP检测方法,沙门氏菌invA基因检测灵敏度最低限为10拷贝,bla_(TEM-1)基因检测灵敏度最低限为10^(2)拷贝,aadA1基因检测灵敏度最低限为10^(2)拷贝,tetB基因检测灵敏度最低限为10^(3)拷贝。本研究所开发的CAMP检测体系,可快速有效地检测沙门氏菌耐药基因,检测体系可使用实时荧光定量PCR设备进行结果判读,也可以使用实验室水浴等温控设备进行基于颜色变化的裸眼结果判读,并可结合微流控芯片进一步提高反应体系密封性,显著减少了试剂用量,降低了对检测设备的需求,从而节约检测成本,将为养殖现场对沙门氏菌耐药状况的实时监测及用药参考提供便捷有力的技术手段。

主 题 词：沙门氏菌 耐药基因 等温扩增 微流控芯片 

学科分类：0832[0832] 08[工学] 083202[083202] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-1700.2021.05.005

馆 藏 号：203106448...