穿透支原体膜蛋白MYPE2350的表达及免疫活性分析

作     者：侯权芳 谭潭 张健 李芬 罗良贤 李冉辉 HOU Quan-fang;TAN Tan;ZHANG Jian;LI Fen;LUO Liang-xian;LI Ran-hui

作者机构：南华大学衡阳医学院病原生物学研究所湖南衡阳421001 郴州市第一人民医院 南华大学衡阳医学院附属郴州医院 

基　　金：湖南教育厅优秀青年项目(No.19B496) 湖南省自然科学基金项目(No.2020JJ4521) 湖南省卫健委科学基金项目(No.20200706) 衡阳市自然科学基金项目(No.2019-117) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2021年第16卷第10期

页      码：1173-1177页

摘      要：目的对穿透支原体膜蛋白MYPE2350进行生物学信息学分析,构建重组原核表达质粒,表达、纯化并检测该蛋白的免疫学活性。方法从NCBI网站获得穿透支原体特有MYPE2350蛋白的氨基酸序列,利用生物信息学软件预测和分析MYPE2350蛋白的理化性质、跨膜区、信号肽和B细胞表位等生物学特性。设计引物,PCR扩增MYPE2350基因片段,将其连接到质粒pET28a。将重组质粒pET28a-MYPE2350转化入大肠埃希菌BL21,用IPTG诱导重组MYPE2350蛋白的表达。分离包含体,使用尿素溶解后利用Ni^(2+)亲和层析法纯化重组MYPE2350蛋白。用重组MYPE2350蛋白免疫小鼠,测定小鼠血清特异IgG含量和IgG2a/IgG1的比值,以及小鼠脾细胞分泌细胞因子的含量。结果 MYPE2350蛋白共有178个氨基酸,相对分子质量为19.4×10^(3),为跨膜蛋白,具有3个跨膜区。该蛋白二级结构中α螺旋占43.82%,β折叠占17.42%,无规卷曲占35.39%,β转角占3.37%。Swiss网站预测的蛋白三级结构的匹配度和可信度不高。MYPE2350蛋白含有多个B细胞表位。构建的重组质粒pET28a-MYPE2350转化BL21后,经IPTG诱导表达重组MYPE2350蛋白,通过亲和层析纯化获得了纯度较高的MYPE2350蛋白。重组MYPE2350蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导小鼠分泌特异性抗体,且IgG2a/IgG1<1。MYPE2350蛋白能诱导小鼠脾细胞IL-4和IL-5(Th2型细胞因子)高表达,但对IFN-γ和TNF-α(Th1型细胞因子)的影响较小。结论克隆表达的重组穿透支原体特有膜蛋白MYPE2350具有良好的免疫原性,能诱导Th2型免疫应答。

主 题 词：穿透支原体 膜蛋白 生物信息学分析 免疫原性 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13350/j.cjpb.211012

馆 藏 号：203106479...