猪圆环病毒2型数字微滴PCR检测技术的建立及应用

作     者：吴朦晨 金晨晨 何永强 曾若雪 陈小金 程昌勇 帅江冰 董志珍 宋厚辉 俞晓平 张晓峰 WU Meng-chen;JIN Chen-chen;HE Yong-qiang;ZENG Ruo-xue;CHEN Xiao-jin;CHENG Chang-yong;SHUAI Jiang-bing;DONG Zhi-zhen;SONG Hou-hui;YU Xiao-ping;ZHANG Xiao-feng

作者机构：中国计量大学生命科学院浙江杭州310018 浙江省检验检疫科学技术研究院浙江杭州310016 天津海关动植物与食品检测中心天津300461 浙江农林大学浙江杭州311300 

基　　金：浙江省重点研发计划项目(2021C02060、2015C02044) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第43卷第10期

页      码：1057-1062页

摘      要：为建立猪圆环病毒2型(PCV2)的微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法,本研究针对PCV2ORF1基因设计引物和探针,经各反应条件的优化,确定反应体系中引物和探针终浓度分别为0.7μmol/L和0.25μmol/L,且退火温度为59℃时,ddPCR方法具有最佳的扩增效率(96%)。特异性试验结果显示,该ddPCR方法除了对PCV2检测结果为阳性外,对PCV1、PCV3和其它常见猪病病原的检测均未见阳性微滴,特异性较强。以10倍倍比稀释的重组质粒标准品pUC57-NA-ORF1为模板,利用建立的PCV2 ddPCR检测技术进行敏感性试验,结果显示,ddPCR的最低检测限达2.93拷贝/μL,比荧光定量PCR(qPCR)高10倍以上,敏感性较高。批内和批间重复性试验结果显示,其变异系数均小于10%,重复性较好。利用建立的PCV2 ddPCR对24份猪组织样品和70份宠物饲料样品进行检测,结果显示,该ddPCR方法对猪淋巴结、脾、肺和肾脏等组织样品的检测结果与qPCR的检测结果一致,均检出10份阳性样品。但ddPCR对饲料样品的检测更为灵敏,共检出PCV2阳性样品14份,其中有5份样品的qPCR检测结果为阴性,表明本研究建立的ddPCR方法敏感性、抗干扰性和可靠性更高。本研究首次建立了PCV2 ddPCR检测方法,为饲料等复杂基质样品中PCV2的检测提供了有力技术手段。

主 题 词：数字微滴PCR 猪圆环病毒2型 最低检测限 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.202103012

馆 藏 号：203106523...