罗非鱼湖病毒S10基因编码蛋白的表达及单克隆抗体的制备

作     者：王雅慧 王英英 王庆 李波 李莹莹 尹纪元 杨广 曾伟伟 WANG Yahui;WANG Yingying;WANG Qing;LI Bo;LI Yingying;YIN Jiyuan;YANG Guang;ZENG Weiwei

作者机构：天津农学院水产学院天津300384 中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业农村部渔药创制重点实验室/广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510385 佛山科学技术学院生命科学与工程学院/广东省动物分子设计与精准育种重点实验室/普通高校动物分子设计与精准育种重点实验室广东佛山440605 

基　　金：国家重点研发计划项目(2019YFD0900101) 广东省基础与应用基础研究基金(2020A1515010327) 广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项(2021KJ119) 国家大宗淡水鱼产业技术体系(CARS-45) 

出 版 物：《广东农业科学》 (Guangdong Agricultural Sciences)

年 卷 期：2021年第48卷第11期

页      码：112-118页

摘      要：【目的】制备抗罗非鱼湖病毒(Tilapia Lake Virus,TiLV)S10节段基因编码蛋白的单克隆抗体(Monoclonal antibody,MAb)。【方法】构建含有TiLV S10基因节段的重组表达质粒pET32a-S10,并将其转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达和镍柱纯化获得高纯度重组S10蛋白;用纯化的重组蛋白免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠多次后,取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合获得杂交瘤细胞,采用有限稀释法和ELISA方法,筛选获得2株能稳定分泌抗S10蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2C3和2E3,并对其特异性、亚型和效价进行分析。【结果】Western blot结果显示,2C3和2E3均能识别S10重组蛋白及TiLV,间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,2C3和2E3只与TiLV感染的TiB细胞呈阳性反应。亚型检测结果显示,2C3抗体为IgG1/к型,2E3抗体为IgG2a/к型。抗体效价测定结果表明,两种MAb的效价分别为1∶12800,1∶51200。【结论】抗TiLV-S10蛋白MAb特异性强、效价高,可为后续TiLV疫苗的研发、免疫学方法的建立及S10蛋白功能的研究提供重要材料和支撑。

主 题 词：罗非鱼 罗非鱼湖病毒(TiLV) S10编码蛋白 重组蛋白 单克隆抗体 免疫学方法 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 0906[农学-水产类] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16768/j.issn.1004-874X.2021.11.014

馆 藏 号：203106566...