6种常见呼吸道感染细菌16s rRNA基因的克隆与鉴定

作     者：干咏华 李爱红 安东善 刘丹薇 欧阳红生 GAN Yong-Hua;LI Ai-Hong;AN Dong-Shan;LIU Dan-Wei;OUYANG Hong-Sheng

作者机构：吉林省人民医院呼吸内科长春130021 吉化集团公司总医院长春132021 吉林大学农学部生化教研室长春130000 

基　　金：吉林省科学技术厅资助项目(20010424) 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2007年第23卷第7期

页      码：641-643,647页

摘      要：目的:克隆并鉴定6种常见呼吸道感染细菌16s rRNA基因,为制备基因芯片探针做准备。方法:设计、合成6种细菌16s rRNA基因扩增引物;PCR扩增16s rRNA基因目的片段;克隆16s rRNA基因片段;最后对重组质粒进行鉴定。结果:(1)6种细菌16s rRNA基因片段的PCR扩增结果:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肺炎克雷伯杆菌、流感嗜血杆菌在1300bp处出现特异的目的片段;铜绿假单胞菌在1100bp出现特异的目的片段,与预计的片段大小吻合。(2)PCR产物分别与pMD18-T载体连接并转化JM109受体菌之后在Ampr培养基表面生长,其中蓝色菌落为阴性克隆,白色菌落是阳性克隆。(3)各克隆质粒PCR鉴定及双酶切鉴定,结果均可见特异目的带。(4)克隆质粒的序列分析示:6种细菌克隆质粒部分16s rRNA基因序列与GenBank中发表序列同源性为99.8%以上,说明细菌16s rRNA基因已克隆成功。结论:成功克隆了大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肺炎克雷伯杆菌、流感嗜血杆菌及铜绿假单胞菌16s rRNA基因片段,为制备基因芯片探针奠定了基础。

主 题 词：呼吸道感染细菌 16s rRNA基因 克隆 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

馆 藏 号：203107081...