同时沉默Livin基因和MTA1基因的siRNA载体的构建

作     者：杨松华 赵国强 郑红 李月白 赵继敏 冯龙 董子明 YANG Songhua;ZHAO Guoqiang;ZHENG Hong;LI Yuebai;ZHAO Jimin;FENG Long;DONG Ziming

作者机构：郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450001 

基　　金：教育部“十五”项目 教育部“211”工程重点学科建设基金资助项目教重办2002第2号 

出 版 物：《郑州大学学报（医学版）》 (Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences))

年 卷 期：2008年第43卷第2期

页      码：202-205页

摘      要：目的:构建同时沉默Livin基因和MTA1基因的小干扰RNA(siRNA)载体。方法:设计Livin和MTA1的siRNA靶序列,合成它们互补的寡核苷酸链,分别退火后重组入pRNAT-U6.2载体,得到pRNAT-U6.2-Livin和pR-NAT-U6.2-MTA1。AccⅡ和XhoⅠ酶切pRNAT-U6.2-MTA1,回收475bp的MTA1siRNA单元,然后与XhoⅠ和PmeⅠ酶切线形化的pRNAT-U6.2-Livin重组,得到pRNAT-U6.2-Livin-MTA1,后者用脂质体包被转染人食管癌细胞EC9706,采用RT-PCR法分别检测转染细胞Livin和MTA1基因mRNA的表达情况。结果:针对Livin基因和MTA1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段分别克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析插入片段正确。PCR扩增证实MTA1siRNA单元重组入pRNAT-U6.2-Livin。RT-PCR检测显示,转染pRNAT-U6.2-Livin-MTA1的EC9706细胞Livin基因和MTA1基因mRNA表达水平皆明显降低。结论:同时沉默Livin基因和MTA1基因表达的siRNA载体构建成功。

主 题 词：RNA干扰 Livin MTA1 载体构建 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-6825.2008.02.003

馆 藏 号：203107089...