可调控的鼠白细胞介素-12双亚基共表达质粒的构建及在体外表达

作     者：陈坚 张斌 薛绪潮 方国恩 苏长青 钱其军 CHEN Jian;ZHANG Bin;XUE Xu-chao;FANG Guo-en;SU Chang-qing;QIAN Qi-jun

作者机构：解放军第81医院肿瘤外科南京210002 第二军医大学附属长海医院普通外科上海200433 第二军医大学附属东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海200438 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:30571830)~~ 

出 版 物：《中国普外基础与临床杂志》 (Chinese Journal of Bases and Clinics In General Surgery)

年 卷 期：2008年第15卷第12期

页      码：892-897页

摘      要：目的构建可经米非司酮(RU486)调控表达小鼠白细胞介素-12(mIL-12)单链融合基因的真核载体,并鉴定其调控表达效果。方法以GCp35Ep40PN质粒为模板,分别获取mIL-12p40和p35亚基的基因,重叠PCR引入linker后,克隆入pCA14质粒,测序正确之后,装入可调控载体pRS-17而构建成真核表达质粒pRS-RUmIL-12。用Lipofectamine2000将pRS-RUmIL-12质粒转染HEK293细胞,以不同剂量的RU486诱导其表达,然后用ELISA法检测其培养上清液中mIL-12蛋白的含量。结果所得mIL-12单链融合基因序列与设计一致。pRS-RUmIL-12在体外转染HEK293细胞后,ELISA检测结果表明该系统具有良好的调控能力:无诱导剂RU486时,mIL-12蛋白表达量很低,而加入诱导剂RU486后,可以诱导mIL-12的表达,并在一定范围内mIL-12的蛋白表达量与诱导剂的浓度呈正相关。结论成功构建了可经RU486调控的mIL-12双亚基共表达的真核表达质粒,可用于进一步的基因调控和基因治疗研究。

主 题 词：白细胞介素-12 融合基因 真核表达 米非司酮 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203107111...