Crabp2对猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响

作     者：张虹亮 包俐 吴夏梦 李沐馨 张灿 王英 雷磊 王水莲 ZHANG Hong-liang;BAO Li;WU Xia-meng;LI Mu-xin;ZHANG Can;WANG Ying;LEI Lei;WANG Shui-lian

作者机构：湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 湖南省汉寿县沧港镇农业和农村经营管理服务站湖南常德415914 

基　　金：国家自然科学基金青年基金项目(31802151) 湖南省自然科学基金青年基金项目(2019JJ50257) 中国博士后科学基金面上项目(2018M642981) 湖南省教育厅优秀青年项目(18B099) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第52卷第1期

页      码：111-119页

摘      要：为了研究胞质视黄酸结合蛋白2(cytoplasm retinoic acid binding proteins 2,Crabp2)对猪卵泡发育的调控作用及机制,笔者通过构建猪Crabp2过表达载体并设计Crabp2 siRNA干扰片段,揭示它们对猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响。通过从屠宰场回收猪卵巢,应用TRIzol法提取组织总RNA,并反转录成cDNA。设计Crabp2基因全长引物,利用PCR克隆Crabp2基因,构建Crabp2过表达载体。同时,设计并筛选出干扰效率最高的Crabp2 siRNA。将Crabp2过表达载体和siRNA片段分别转染至猪卵泡颗粒细胞中24 h,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测颗粒细胞Crabp2的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,同时检测线粒体凋亡通路和死亡受体凋亡通路相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、Fas及FasL的表达变化。对照组为转染pcDNA 3.1(+)空载体和siRNA阴性对照(NC)片段的卵泡颗粒细胞。结果显示,Crabp2过表达载体转染猪卵泡颗粒细胞可使细胞Crabp2的表达极显著升高(P<0.01),同时显著降低细胞凋亡率(P<0.05),而细胞凋亡通路中抑凋亡基因Bcl-2的表达显著升高(P<0.05),促凋亡基因Bax、Caspase-3、Fas极显著降低(P<0.01),FasL显著降低(P<0.05)。与此相反,Crabp2 siRNA片段转染猪卵泡颗粒细胞可使细胞Crabp2的表达极显著降低(P<0.01),同时显著增加细胞凋亡率(P<0.05),而Bcl-2的表达显著降低(P<0.05),Bax、Caspase-3和FasL极显著升高(P<0.01),Fas显著升高(P<0.05)。结果表明,Crabp2可能通过抑制Fas/FasL介导的死亡受体凋亡通路和线粒体凋亡通路,进而抑制猪卵泡颗粒细胞凋亡,从而参与调控猪卵泡的发育。

主 题 词：猪 Crabp2 卵泡颗粒细胞 凋亡 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0022

馆 藏 号：203107145...