利用Red重组系统敲除家蚕核型多角体病毒的vlf-1基因及对病毒复制的影响

作     者：杜超逸 于威 全滟平 陈健 聂作明 吕正兵 张耀洲 

作者机构：浙江理工大学生物化学研究所杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 

基　　金：国家高技术研究发展计划"863"项目(No.2011AA1006-03) 浙江省自然科学基金项目(No.Y3090339 Y31101-87) 浙江省教育厅科技项目(No.Y201019102) 

出 版 物：《蚕业科学》 (ACTA SERICOLOGICA SINICA)

年 卷 期：2013年第39卷第2期

页      码：283-288页

摘      要：利用Red重组系统和家蚕核型多角体病毒(BmNPV)Bacmid在*** DH10Bac中快速敲除BmNPV极晚期表达因子基因vlf-1,调查对病毒复制的影响,以探究BmNPV vlf-1基因的功能。首先从*** BW25113中提取能表达Red重组酶的质粒pKD46,将其转化到*** DH10Bac中,获得可用于BmNPV基因打靶的DH10Bac(含有质粒pKD46)菌株;再为发生基因同源重组设计一对长60 bp的引物,5 端长40 bp,分别为vlf-1基因的左右同源臂,3 端长20 bp,分别为氯霉素抗性基因(cat)的首尾序列;以含有cat的pKD3质粒为模板,PCR扩增含vlf-1同源臂的cat基因,即打靶线性化片段;将该线性化片段转入DH10Bac(pKD46)菌株,在Red重组酶的作用下,线性化片段与Bacmid DNA中的vlf-1基因发生同源重组。利用设计的2对特异性引物PCR验证cat基因替换vlf-1基因操作成功,获得vlf-1缺失型BmNPV。将vlf-1缺失型Bacmid DNA转染BmN细胞,利用qPCR分析vlf-1基因缺失对于病毒复制的影响,结果表明:vlf-1基因缺失对BmNPV起始DNA复制没有明显的影响,但是可能影响之后的病毒装配和侵染。

主 题 词：家蚕核型多角体病毒 vlf-1基因 Red重组系统 病毒复制 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 0906[农学-水产类] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13441/j.cnki.cykx.2013.02.024

馆 藏 号：203107317...