西部马脑脊髓炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法建立及标准质控品制备

作     者：谷强 吴亚琼 高志强 刘环 张伟 蒲静 乔彩霞 张鹤晓 吴清民 Gu Qiang;Wu Yaqiong;Gao Zhiqiang;Liu Huan;Zhang Wei;Pu Jing;Qiao Caixia;Zhang Hexiao;Wu Qingmin

作者机构：中国农业大学动物医学院，北京 100094 北京出入境检验检疫局，北京 100026 北京出入境检验检疫局北京100026 中国农业大学动物医学院北京100094 

基　　金：质检公益性行业科研专项“马重大外来虫媒病抗体、核酸快速检测技术研究”(201010033) 

出 版 物：《中国动物检疫》 (Chinese Journal of Animal Health Inspection)

年 卷 期：2013年第30卷第11期

页      码：80-84页

摘      要：选取西部马脑炎病毒代表株进行序列比对分析，选择保守区域，设计合成引物和TaqMan探针。经对反应体系和条件进行优化，建立了检测西部马脑炎病毒的实时荧光RT-PCR检测方法，应用建立的方法对西部马脑炎病毒核酸、东部马脑炎病毒核酸、马动脉炎病毒核酸、马疱疹病毒1型核酸、马流感病毒H3N8亚型核酸进行检测，结果表明建立的方法只能检出西部马脑炎病毒核酸，与另外4种病毒核酸无交叉反应。进一步通过体外转录制备了西部马脑炎病毒McMillan株7442~10011的cRNA片段，经拷贝数计算、稀释、分装、均匀性和稳定性检验后，作为质控品对建立的方法进行评价。结果显示，所建立的方法其分析灵敏度可达10拷贝。对197份进口马血样品检测用时仅4小时，表明该检测技术快速、灵敏、特异。因此，本研究建立的方法可作为技术储备用于进口马匹的疫病筛查。

主 题 词：西部马脑炎病毒 实时荧光RT-PCR 标准质控品 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-944X.2013.11.026

馆 藏 号：203107342...