猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立

作     者：郑兰兰 张君涛 李明凤 郭显坡 陈红英 崔保安 魏战勇 

作者机构：河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002 

基　　金：河南省重大科技攻关资助项目(111100110300) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2014年第34卷第3期

页      码：366-370,378页

摘      要：参照GenBank登录的相关基因序列,设计了2对引物分别用于扩增伪狂犬病毒(PRV)gH基因与猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因的部分片段。将测序正确的PRV gH基因与PCV2ORF2基因片段克隆入pGEM-T Easy载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果显示,PCV2与PRV荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为80.8℃和86.7℃,熔解曲线特异,灵敏度分别可达215拷贝/μL和180拷贝/μL,是普通PCR检测方法的100倍。结果表明,建立的PCV2与PRV荧光定量PCR检测方法实现了2种病毒的同时检测,能够对PRV、PCV2混合感染的临床病料进行快速诊断。

主 题 词：猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病毒 SYBR Green I 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2014.03.001

馆 藏 号：203107353...