抗菌肽-裂解酶双机制抗菌蛋白质的设计与可溶性表达

作     者：汪婷婷 戴佳咪 郑永祥 余蓉 张纯 WANG Tingting;DAI Jiami;ZHENG Yongxiang;YU Rong;ZHANG Chun

作者机构：四川大学华西药学院四川成都610041 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(批准号:81973226) 

出 版 物：《华西药学杂志》 (West China Journal of Pharmaceutical Sciences)

年 卷 期：2022年第37卷第1期

页      码：6-10页

摘      要：目的针对G^(-)菌外膜阻挡裂解酶发挥作用的情况,设计抗菌肽-裂解酶双机制抗菌蛋白,并优化表达体系,获得可溶性表达的抗菌蛋白质。方法采用同源模建方法将绵羊骨髓细胞抗菌肽与源自噬菌体JD010的裂解酶融合设计新的抗菌蛋白质(SMAP-Lysin)。通过构建pET30a、pBV220表达载体的方式,利用小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)的促溶作用,促进SMAP-Lysin的可溶性表达。结果仅在pBV220载体上,SMAP-Lysin有明显的表达,但其表达过程会诱导宿主细菌的死亡,无法有效分离纯化目标蛋白质;通过SUMO标签的促溶作用,可实现SMAP-Lysin的融合表达,且SUMO肽段的融合避免了宿主细菌的死亡;采用亲和层析,酶切步骤处理后,可得到纯化的抗菌蛋白质SMAP-Lysin。结论大肠杆菌是用于表达重组蛋白质的重要工程菌,采用SUMO标签融合表达的方式可有效降低抗菌蛋白对表达菌宿主的毒性,提高抗菌蛋白的可溶性表达,有利于抗菌蛋白的纯化。

主 题 词：绵羊骨髓细胞抗菌肽 裂解酶 双机制 抗菌蛋白 重组蛋白 小分子泛素样修饰蛋白标签 可溶性表达 革兰氏阴性菌 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.13375/j.cnki.wcjps.2022.01.002

馆 藏 号：203107416...