荧光实时定量PCR检测STAT6圈套寡核苷酸对支气管哮喘小鼠脾淋巴细胞转录IL-4mRNA的影响

作     者：谢鹏 熊瑛 赵学飞 刘春风 王文强 黄超群 Xie Peng;Xiong Ying;Zhao Xuefei;Liu Chunfeng;Wang Wenqiang;Huang Chaoqun

作者机构：川北医学院第二临床医院南充市中心医院重症医学科637000 四川医科大学附属第一医院呼吸内科泸州646000 遂宁市中医院呼吸内科629000 

出 版 物：《国际呼吸杂志》 (International Journal of Respiration)

年 卷 期：2015年第35卷第17期

页      码：1292-1298页

摘      要：目的研究STAT6圈套寡核苷酸（ODN）对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠脾淋巴细胞转录IL-4mRNA的影响作用。方法实验细胞分组：空白组（A组）、哮喘OVA组（B组）、治疗哮喘OVA组（C组）、干扰哮喘OVA组（D组）、脂质体哮喘OVA组（E组）。设计并人工合成STAT6圈套ODN及无序ODN，全硫代修饰的ODN。用OVA和氢氧化铝复制哮喘模型，用淋巴细胞分离液分离小鼠脾淋巴细胞，体外培养后，导入由阳离子脂质体2000转染剂携带的圈套ODN进入淋巴细胞培养，抽提RNA进行反转录，建立实时荧光聚合酶链反应（PCR）反应条件，通过比较ct进行基因表达的相对定量分析。观察圈套ODN的转染对脾淋巴细胞转录IL-4mRNA的影响。结果A、B、C、D、E组的IL-4mRNA分别表达为：0．02545±0．00433，0．06742±0．00128，0．03151±0．00530，0．06504±0．00775，0．05952±0．00561。A组和C组低于B组、D组和E组，其差异有统计学意义（t=6．204，P〈0．01），C组和A组间差异无统计学意义（t=1．310，P〉0．05），B组和D组、E组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论熔解曲线分析结果证明了PCR反应的特异性，应用SYBRGreenI实时荧光PCR可以特异、准确地分析STAT6圈套0DN能下调STAT6活性，降低转录IL-4mRNA的表达。

主 题 词：SYBR Green I 实时定量荧光PCR 信号转导和转录激活因子 IL-4 mRNA 淋巴细胞 哮喘 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-436X.2015.17.004

馆 藏 号：203107432...