猪轮状病毒国内分离株JL94 VP7基因克隆与真核表达质粒的构建

作     者：师东方 李一经 范锡龙 贾永清 王君伟 刘宝全 陈淑红 

作者机构：东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省兽药饲料监察所哈尔滨150009 

基　　金：黑龙江省"九五"科技攻关计划项目 项目编号 :G99B8_1_1 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2002年第24卷第6期

页      码：408-412页

摘      要：用MA10 4细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株JL94。利用一对根据Genebank中已发表的轮状病毒VP7基因cDNA序列而设计并合成的引物 ,通过逆转录—聚合酶链反应 (RT_PCR)从JL94毒株扩增出VP7基因全长cDNA。将其插入pMD18_T载体中 ,构建了重组质粒pMD18_T_JL94 /VP7,并对其进行了HindⅢ ,HindⅢ和BamHⅠ的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定 ,证明pMD18_T_JL94 /VP7中的插入基因为轮状病毒的VP7基因。重新设计一个带有Kozak序列的上游引物 ,通过PCR扩增出带有Kozak序列的vp7基因并将其插入pMD18_T载体中构建了重组质粒pMD18_T_VP7,酶切鉴定其大小和方向后 ,与真核表达载体pcDNA 3.1(+)分别用HindⅢ和BamHⅠ双酶切 ,胶回收纯化后连接。经酶切和核苷酸序列检测鉴定 。

主 题 词：猪轮状病毒 国内分离株 基因克隆 真核表达质粒 VP7基因 RT-PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.2002.06.003

馆 藏 号：203107474...