人乳铁蛋白cDNA基因乳腺表达载体的构建与鉴定

作     者：孟立 张艳丽 许欣 王子玉 闫益波 庞训胜 钟部帅 黄荣 宋洋 王金玉 王锋 Li Meng;Yanli Zhang;Xin Xu;Ziyu Wang;Yibo Yan;Xunsheng Pang;Bushuai Zhong;Rong Huang;Yang Song;Jinyu Wang;Feng Wang

作者机构：南京农业大学动物胚胎工程技术中心南京210095 扬州大学动物科技学院扬州225009 

基　　金：国家"转基因生物新品种培育"重大专项(No.2008ZX08008-004) 江苏省动物繁育与分子设计实验室开放课题(No.YDKT0801)资助~~ 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2011年第27卷第2期

页      码：253-261页

摘      要：为了构建人乳铁蛋白基因（hLF）的乳腺表达载体并验证其在乳腺细胞中的表达情况,本载体以山羊β-casein基因上游包括启动子、外显子1、内含子1、部分外显子2作为5′端调控序列,下游包括部分外显子7、内含子7、外显子8、内含子8、外显子9及3′部分基因组片段作为3′端调控序列,长度分别为6.2 kb和7.1 kb,将hLF基因（目的基因）和Neo基因（筛选标记）分别插入到5′端调控序列和3′端调控序列的下游,构建成pBC1-hLF-Neo载体,其全长为25.348 kb。为了检测该载体的生物学功能,用脂质体介导法将其分别导入到山羊乳腺上皮细胞GMC和小鼠乳腺癌细胞株C127中进行表达验证,经G418抗性筛选8~10 d,得到了药物抗性细胞克隆,经催乳素、胰岛素及氢化可的松诱导培养,通过RT-PCR、Western blotting以及重组hLF抑菌圈试验表明,山羊β-casein基因启动子驱动的hLF基因能够在C127和GMC乳腺上皮细胞中转录翻译,且重组hLF具有抑制大肠杆菌生长的生物活性,这为下一步建立稳定整合hLF基因奶山羊胎儿成纤维细胞系奠定了基础。

主 题 词：hLF pBC1-hLF-Neo GMC细胞 C127细胞 生物学功能 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13345/j.cjb.2011.02.009

馆 藏 号：203108005...