猪瘟病毒Core蛋白的原核表达和抗体制备及应用

作     者：景娇 张小敏 何丹妮 刘珂 周斌 陈溥言 JING Jiao;ZHANG Xiaomin;HE Danni;Liu Ke;ZHOU Bin;CHEN Puyan

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 

基　　金：江苏省自然科学基金(BK20131317) 国家自然科学基金青年基金(31001062) 中央高校基本科研业务费自主创新重点项目(KYZ201416) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2015年第47卷第6期

页      码：7-11页

摘      要：根据猪瘟病毒衣壳蛋白(Core)基因序列设计一对特异性引物,RT-PCR从猪瘟兔化弱毒中扩增出完整的Core基因,经酶切和序列测定后,克隆到携带His标签的原核表达载体p ColdⅠ中,成功构建了重组质粒p Cold-Core,并转化到大肠杆菌Rosseta 2(R2)中;利用IPTG诱导表达目的蛋白并鉴定表达效果。结果表明:经终浓度为0.1 mmol/L IPTG诱导24 h后,Core基因在R2中获得分泌性可溶表达,表达量占菌体蛋白的32.6%,SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量为20 ku。Western blot结果显示Core蛋白可以分别与His单抗和猪瘟病毒阳性抗血清发生特异性反应,均出现单一反应带。将目的蛋白切胶后免疫Balb/c小鼠,制备特异性抗血清,Western blot结果显示该抗血清与衣壳蛋白反应后有明显的特异性条带,经激光共聚焦鉴定抗血清能够与胞浆中的猪瘟病毒粒子发生反应。结果表明,Core基因表达成功,制备的抗血清具有生物学功能。本研究为深入探讨Core蛋白在猪瘟病毒致病机制上的作用奠定了基础。

主 题 词：猪瘟病毒 Core蛋白 原核表达 抗血清 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203108060...