锡兰钩虫SLP-1基因的克隆表达与免疫学特性分析

作     者：何龙 赵琪 庄婷婷 朱诗兰 陈晓雨 李国清 HE Long;ZHAO Qi;ZHUANG Ting-ting;ZHU Shi-lan;CHEN Xiao-yu;LI Guo-qing

作者机构：华南农业大学兽医学院广东广州510642 

基　　金：国家自然科学基金项目(31672541) 广东省科技计划项目(2014A020214005) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2022年第44卷第1期

页      码：80-85页

摘      要：为了研究锡兰钩虫鞘脂激活蛋白样蛋白(Ace-SLP-1)的免疫学特性,本研究以锡兰钩虫成虫cDNA为模板,根据GenBank中Ace-SLP-1基因序列(DQ855414.1)设计特异性引物,采用RT-PCR扩增Ace-SLP-1基因,结果显示,PCR扩增了Ace-SLP-1基因,其ORF全长315 bp,编码104个氨基酸;利用在线软件对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果显示该蛋白为疏水蛋白,前17个氨基酸为信号肽序列且有跨膜结构域等;根据AceSLP-1基因编码氨基酸序列信息将其成熟肽编码基因序列(Ace-XL-SLP-1)克隆至原核表达载体pET-28a中,构建的重组质粒鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示重组Ace-XL-SLP-1蛋白(r Ace-XL-SLP-1)以包涵体形式表达,分子质量为14.4 ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可以分别被鼠His标签MAb及锡兰钩虫感染犬的阳性血清所识别,具有较好的反应原性。将r Ace-XL-SLP-1分别以0~40μg/mL体外刺激健康犬的外周血淋巴细胞(PBMC),采用CCK-8试剂盒检测其对PBMC增殖的影响,结果显示,与对照组相比,20μg/mL与40μg/mL的r Ace-XL-SLP-1均可显著刺激犬PBMC的增殖(P<0.05),表明该重组蛋白能够诱导宿主细胞产生免疫应答反应,免疫原性较好。本研究首次克隆表达了锡兰钩虫成虫Ace-XL-SLP-1基因,并对其免疫学特性做了初步研究,为锡兰钩虫血清学诊断方法的建立和疫苗的研制提供参考数据。

主 题 词：锡兰钩虫 鞘脂激活蛋白样蛋白 原核表达 免疫学特性 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.202104036

馆 藏 号：203108324...