沉默热休克蛋白70-2基因经线粒体依赖通路介导肝癌细胞凋亡

作     者：夏丽敏 田德安 张琼 晏维 王波 刘梅 黎培员 陈斌 XIA Li-min;TIAN De-an;ZHANG Qiong;YAN Wei;WANG Bo;LIU Mei;LI Pei-yuan;CHEN Bin

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科武汉430030 

基　　金：National Natural Science Foundation of China(31402054) Natural Science Foundation of Shandong Province(ZR2013CM013) 

出 版 物：《中华肝脏病杂志》 (Chinese Journal of Hepatology)

年 卷 期：2008年第16卷第9期

页      码：678-682页

摘      要：目的探讨沉默热休克蛋白（HSP）70—2对肝癌细胞生长、凋亡的影响，以及诱导肝癌细胞凋亡的详细作用机制。方法Western blot、免疫细胞化学法检测HSP70—2在4种肝癌细胞和正常肝细胞中的表达。设计合成针对HSP702基因的特异性短发夹状RNA（shRNA），构建真核表达载体HSP70-2 shRNA1和HSP70—2 shRNA2。转染肝癌细胞后，四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖，膜联蛋白／碘化丙啶双染法检测细胞凋亡情况，罗丹明染色检测细胞线粒体跨膜电位变化，Western blot检测多聚ADP-核糖聚合酶、caspase3、caspase-9蛋白切割情况，以及细胞色素C、Bax、Bcl-2蛋白的表达变化。结果HSP702在4种肝癌细胞中均高表达，在L02细胞中仅有微量表达。HSP70-2 shRNA1、shRNA2均能有效抑制肝癌细胞中HSP70—2的表达。沉默HSP70-2基因显著抑制肝癌细胞生长，诱导肝癌细胞凋亡；转染48h后，shRNAl和shRNA2诱导HepG2细胞的凋亡指数分别为55．8％±1．8％和57．1％±1．6%；诱导Huh细胞凋亡指数分别为54．9%±1．1％和60．2％±2．6%，与对照组相比，差异均有统计学意义，P值均〈0．01。转染HSP70—2 shRNA48h后，肝癌细胞线粒体跨膜电位显著下降，细胞色素C从线粒体释放到胞质中，caspase3、caspase-9激活，多聚ADP核糖聚合酶被剪切降解，抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少，促凋亡蛋白Bax表达明显增加。结论沉默HSP70-2能通过激活线粒体凋亡通路导致肝癌细胞凋亡。

主 题 词：癌,肝细胞 热休克蛋白 细胞凋亡 RNA干扰 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1007-3418.2008.09.010

馆 藏 号：203108637...