杨树基因组SRAP扩增体系的建立与优化

作     者：谭碧玥 王源秀 徐立安 TAN Bi-yue;WANG Yuan-xiu;XU Li-an

作者机构：南京林业大学森林资源与环境学院南京210037 安徽师范大学 

基　　金：国家自然科学基金“杨树高密度遗传图谱构建及高解析度QTLs定位研究”(编号:30230300) 

出 版 物：《林业科技开发》 (China Forestry Science and Technology)

年 卷 期：2009年第23卷第2期

页      码：25-29页

摘      要：以响叶杨和银白杨及F1代为实验材料,利用正交设计直观分析法和单因素随机试验对杨树SRAP反应体系中各组分(TaqDNA聚合酶、dNTP、引物和Mg2+)的浓度进行优化;通过实验确定10μL反应体系为:引物0.35μmol/L,TaqDNA聚合酶0.5U,dNTP0.2mmol/L,Mg2+2.0mmol/L,10×PCRbuffer1μL,模板DNA1μl(20ng/μL)。同时利用最佳反应体系以及正交设计直观分析法对PCR扩增程序进行筛选,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。结果表明最佳反应程序为:开始94℃变性5min,反应前5个循环在94℃1min,37℃30s,72℃1min条件下运行;之后35个循环在94℃1min,54℃1min,72℃1min条件下运行,最后延伸7min;12℃保存。并利用两树种的杂种F1代对优化的反应体系和程序的可行性进行了验证。

主 题 词：响叶杨 银白杨 SRAP 正交设计 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090202[090202] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-8101.2009.02.008

馆 藏 号：203108652...